冻融对发酵用大肠杆菌甘油保存的影响

摘要

:目的:探讨冻融对发酵用大肠杆菌甘油保存的影响.方法:将大肠杆菌用 10%的甘油溶液

制成菌悬液

,分成 3 组,测定各组菌种的活菌数,同时置-20

℃冷冻处理.3 组分别被冻融处理

1、2、3 次.测定冻融处理后、冻存 1 年及 2 年各组的活菌数.结果:随着冻融次数的增加,冻融处

理后

,冻存 1 年及 2 年的活菌数均明显降低,冻融次数越多,细菌存活率越低 

结论

:反复冻融会降低菌种的存活率.

微生物菌种的保存方法因微生物种类不同而有所不同

,国内外对此有较多的报道[1～3].甘油

保存法是生产中常用的方法之一

.在甘油保存菌种过程中,细胞内外形成的冰晶会对细胞造成

结构上的损伤

,从而影响菌种的存活率.本文主要探讨了反复冻融对发酵用大肠杆菌甘油保存

的影响

.为制药和微生物工作者提供具有参考价值的数据.

1.材料

    大肠杆菌 PJLA605-HIL2.

    LB 固体培养基:胰蛋白胨(英国 Oxoid)10 g、酵母抽提物(英国 Oxoid)5 g,氯化钠 10 g,溶解并

定容至

1 000 ml,调 pH 至 7.2,固体培养基加 2%琼脂.

2.方法和结果

  2.1 大肠杆菌培养

    将待分离的菌种划 LB 平板,以取得单菌落,经模拟发酵选出优良菌种,将此菌种接到 LB 斜

面上

,30

℃,培养 24 h.

  2.2 大肠杆菌冻存

    用 10%甘油溶液洗下培养好的菌种,并在无菌小烧杯中混匀,制成浓度为 1×108 个/ml 的菌