2.2 试验方案

向 600 g 土样中添加不同浓度的 As(Ⅴ)(Na3AsO4·12H2O，AR)溶液，使 As(Ⅴ)含量分

别为 0、25、50、100、200、400 mg·kg-1，并调节土壤含水量为最大持水量(WHC)的 35%、

65%、110%，分别代表土壤水分条件为干燥、湿润及淹水.混匀后加盖密闭，于(25±1)℃的

培养箱中暗培养，期间称重法控制土壤水分含量;定期(1、8、15、30 d)取样测定并计算酶

动力学参数.

土壤碱性磷酸酶动力学测定：在 3.00 g 土壤中加入 0.25 mL 甲苯，15 min 后添加 20 mL

采用缓冲液(pH=9.4)配制的不同浓度(0.0010、0.0025、0.0050、0.010 mol·L-1)的磷酸苯

二钠溶液，37 ℃培养，定时取样，采用磷酸苯二钠比色法测定土壤磷酸酶活性(关松荫，1987).

每个处理重复 3 次，并设无底物和无土壤处理为对照.

2.3 数据处理

土壤酶动力学参数 Km、Vmax 的计算参考文献，具体而言，米氏常数 Km 和最大反应速度

Vmax 可用 Michaelis 方程的积分式计算：

经数学变换和整理得到：

式中，t 为酶促反应时间(h)，S0、St 分别是初始时刻和 t 时刻底物浓度(mmol·L-1).

可见，上式是一条 1/t×ln(S0/St)对 1/t×(S0-St)的直线方程.在反应期间通过测定不同时

间段利用的底物浓度(或生成的产物浓度)，并通过线性回归，即可求得 Km 和 Vmax 值.

土壤酶促反应速度常数 k 计算如下(和文祥等，2001)：

式中，t 为酶促反应时间(h)，S0、St 分别是初始时刻和 t 时刻底物浓度(mmol·L-1).

砷对土壤酶抑制常数 Ki 的计算见文献(朱铭莪，2011;谭向平，2014)，其中，竞争性抑

制动力学方程为：