摘要选取广泛栽培的著名食用菌香菇、平菇和姬菇菌丝体为研究菌种,采用
3,5-二硝
基水杨酸(
DNS)比色法检测供试食用菌的淀粉酶产生能力。以 2%可溶性淀粉为唯一碳源
的查氏液体培养基诱导发酵,供试食用菌产生的淀粉酶活力在
1.513~3.417 U/ mL,为食用
菌工业发酵菌种的选育提供了参考依据和分析方法。
关键词食用菌;发酵液;
DNS 法;淀粉酶;活力测定
中图分类号
Q935;Q556 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2011)11-0016-01
AmylaseActivityDeterminationofEdibleFungibyDNS
ZENG Dong-fangYANG FanNIE Huan-huan
(
Laboratory of Fungal Physiology , Wuhan Institute of Technology , Wuhan Hubei
430074)
AbstractEnzyme energy of amylase from edible fungi was determinated based on 3 , 5-
dinitryl-salicyle ( DNS ) .Taking czapek as induction medtum in whith the only carbon source
was 2% soluble starch,and amylase energy ranged from 1.513 to 3.417 U/mL among Lentinula
edodes , Pleurotus ostreatus , Pleurotus cornucopiae , so as to put forward a reference and
analysis method for the edible fungistrain selection.
Key wordsedible fungi;fermention;DNS;amylase;activity determination
经过人工驯化培养的食用真菌的菌丝体,可以栽培扭结成食药用价值很高的子实体。近
年来,人们发现食用真菌菌丝体也可以仿效青霉菌发酵,大规模生产食用菌多糖、抗生素、
酶制剂等亟待研发的生物活性物质
[1]。食用菌发酵有赖于适宜的工艺条件与生物反应器,
但更取决于具工业开发价值的生产菌种的生理性状,其中包括食用菌生产菌种对环境的适
应性,归结为食用菌的代谢能力,能够利用廉价原料迅速生长并大量合成目的产物。许多工
业发酵菌种不能直接利用淀粉,生物工厂必须对原材料进行预处理,通过液化、糖化生产微
生物可以直接利用的淀粉水解糖。如果选育出具有淀粉酶活力的生产菌种,就可以实现边糖
化边发酵,可极大地提高生产效率。因此,探讨灵敏而准确的食用菌淀粉酶活力的测定技术,
具有重要的生理学意义和实践应用潜力。
淀粉酶活性测定方法较多
[2],但大致分为 4 类:一是测定底物淀粉的消耗量,有粘度
法、浊度法和碘
―淀粉比色法等;二是生糖法,测定产物葡萄糖的生成量;三是色原底物分
解法;四是酶偶联法。利用
3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法测定还原糖含量来反映淀粉
酶活力是目前较常采用的方法。此法是用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量,
以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。该方法测试所用试剂易得,溶
液有效期长,且测试精确度高,结果比较可靠。故笔者采用此法来测定供试食用菌产生淀粉
酶的活力
[3-5]。
1 材料与方法
1.1 供试材料
香菇(
Lentinula edodes)、平菇(Pleurotus ostreatus)和姬菇(Pleurotus cornucopiae)
新鲜子实体购买于超市,取菌柄和菌盖交接处进行组织分离。马铃薯葡萄糖琼脂培养基配方
为马铃薯
200 g,葡萄糖 20 g,琼脂 15~20 g,水 1 000 mL,pH 值自然。27
℃恒温培养 5~6
d,培养基上长满白色丝状菌落,经出菇试验鉴定所得菌株确为香菇、姬菇和平菇。同时,分
离酒曲根霉(
Rhizopus sp.)平行测定淀粉酶的活力。
1.2 发酵液制备
在以
2%可溶性淀粉为唯一碳源的查氏(Czapek)[6]液体培养基中分别接种香菇、平菇、
姬菇、酒曲根霉,
27
℃恒温摇床培养 5~6 d,无菌过滤得食用菌发酵液。供试查氏液体培养