摘要
采用单因素试验优化榆黄菇产漆酶发酵条件,筛选出最适宜产漆酶发酵条件为:
接种量
3%,温度 30
℃,初始 pH 值 6.0~7.0,加入可溶性淀粉作为碳源,加入蛋白胨、酵
母膏为氮源。
关键词
榆黄菇;漆酶;发酵条件
中图分类号
S646.1+9 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2013)09-0079-01
榆黄菇是一种分解纤维素、木质素能力较强的木腐性食用菌,可在榆树等阔叶树、玉米
芯、稻草培养基上生长发育。漆酶为一类多酚氧化酶
[1],是可降解纤维素、木质素的主要酶
类之一。其在稻草秸秆的生物处理、生物除污
[2]、高分子聚合[3]等方面的应用具有巨大的潜
力。本文对榆黄菇产漆酶发酵条件进行了系统研究,以期为秸秆生物质工业化开发利用提供
必要的理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试菌株为榆黄菇菌株,由吉林农业科技学院微生物实验室提供。其他供试材料有马铃
薯、蔗糖、葡萄糖、可溶性淀粉、乳糖、玉米秸秆粉碎物、氨基乙酸、蛋白胨、酵母膏、酒石酸铵、
豆饼粉。供试试剂有(
NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4·7H2O 等。
1.2 试验方法
将活化的榆黄菇菌种接种于
PDA 培养基上,30
℃培养,待培养基上长满菌落备用。
1.2.1 接种量对榆黄菇产漆酶的影响。各量取 45.0 mL 培养基放入 6 个 150 mL 的三角瓶
中,接种量按
1%~11%(按 2 个百分点递增),30
℃,110 r/min 摇床振荡培养,7 d 后测
酶活
[4-5]。
1.2.2 温度对榆黄菇产漆酶的影响。在 30
℃条件下培养 7 d 后,分别在 20、25、30、35、40
℃的温度条件下再培养 4 d 后测酶活,其方法同上。
1.2.3 初始 pH 值对榆黄菇产漆酶的影响。用醋酸缓冲液把基础液体培养基的初始 pH 值
分别调为
3.0、4.0、5.0、6.0、7.0,接种方法和培养方法同上,测酶活。
1.2.4 碳源对榆黄菇产漆酶的影响。在基础产酶培养基中分别添加浓度为 20 g/L 的蔗糖、
葡萄糖、可溶性淀粉、乳糖和玉米秸秆粉碎物作为碳源。培养条件和酶活测定方法同上。
1.2.5 氮源对榆黄菇产漆酶的影响。在基础产酶培养基中分别加入浓度为 1 g/L 的硫酸铵、
蛋白胨、酵母膏、酒石酸铵、豆饼粉作为氮源,培养条件和酶活测定方法同上。
1.3 漆酶活力测定
按照
Rodort Bourbounais[6]方法,以 ABTS 为底物,酶的活力
△OD 值定义为:1 min 内
反应的酶液在
420 nm 波长下吸光值的增加量。
2 结果与分析
2.1 接种量对榆黄菇产漆酶的影响
从图
1 可以看出,最好的接种量是 3%。接种量太多,培养液粘度会增加,容易造成溶
氧不足,菌丝营养不足,且产生大量的生物热,使产酶活力下降。
2.2 温度对榆黄菇产漆酶的影响
过高或过低的温度均会降低菌株代谢速率,温度较低时,菌体生长较慢,酶活力偏低
温度较高时,菌体过早老化,酶活也偏低。从图
2 可以看出,最适温度为 30
℃。
2.3 初始 pH 值对榆黄菇产漆酶的影响
从图
3 可以看出,pH 值对榆黄菇产酶活力的影响较大,pH 值在 6.0~7.0 时酶活力最
大,过酸或过碱都会引起酶活的变化。
2.4 碳源对榆黄菇产漆酶的影响
从图
4 可以看出,榆黄菇产漆酶最适碳源为可溶性淀粉,其次是葡萄糖和玉米秸秆粉
碎物。