摘
要:研究表面活性剂协同超声辅助提取枇杷叶中的总三萜酸。以水为提取溶剂,考
察表面活性剂的种类、表面活性剂的质量浓度、料液比、提取温度及时间对三萜酸得率的影响,
再通过正交实验优化提取工艺。结果表明表面活性剂协同超声提取枇杷叶总三萜酸的最佳工
艺为吐温
60 的质量浓度为 1%,料液比 1:25,温度为 50
℃,提取时间为 30min,总三萜
酸的得率为
12.17%。
关键词:表面活性剂;超声辅助提取;枇杷叶;三萜酸
枇杷叶为蔷薇科
Rosaceae 植物枇杷 Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.的干燥叶,主
产于广东、广西、江苏等地,具有清肺止咳、降逆止呕等功效
[1]。据报道枇杷叶的主要化学成
分有糖苷类、三萜类、挥发油类及黄酮类等
[2]。其中三萜类成分含量丰富,陈欢等[3]利用色
谱分离技术从枇杷叶的乙醇提取物中分离得到了乌索酸、齐墩果酸、科罗索酸及其系列衍生
物。现代药理研究表明乌索酸和齐墩果酸在保肝、降糖、抗炎及抗病毒方面具有较强的药理活
性
[4]。由于上述化合物结构相似且多具有酸性,故称为三萜酸。三萜酸在水中的溶解度非常
低,故提取三萜酸的溶剂常选用乙醇。例如李开泉等
[5]采用 90%的乙醇为溶剂从枇杷叶药
渣中提取三萜酸,蒙瑞波等
[6]采用 70%的乙醇回流提取三萜酸等。本实验考虑三萜酸具有
酸性可溶于碱液中,采用碱水为溶剂、表面活性剂协同超声提取法
[7]优选枇杷叶中总三萜
酸的提取工艺,以期获得一种得率高、安全又节能的提取三萜酸的新工艺。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
枇杷叶,宜春市老百姓大药房;吐温
20、吐温 60、吐温 80、司盘 60、司盘 80,临沂优尼
特生物科技有限公司;乌索酸标准品(纯度:
99.82%),宜春学院研制;其它化学试剂均
为分析纯;实验用水为蒸馏水。
T6 新世纪紫外可见分光光度计,北京普析通用有限责任公司; KQ-250E 超声波清洗机,
昆山舒美;
AB204-S 型梅特勒电子天平,北京梅特勒-托利多有限公司。
1.2 实验方法
1.2.1 枇杷叶总三萜酸的提取工艺
枇杷叶洗净晒干,粉碎过
40 目筛。准确称取枇杷叶干粉 10.0g,放入三角锥瓶中,加入
适量的表面活性剂溶液,用氢氧化钙调
pH8~9[8],混合均匀,以设定条件进行超声处理;
过滤,滤液用盐酸调
pH3~4,至沉淀析出完全为止;过滤,沉淀用水洗涤 2~3 次,置
105
℃的烘箱内干燥至恒重,得总粗三萜酸产品。
1.2.2 总三萜酸的含量测定[9](乌索酸比色法)
1.2.2.1 乌索酸对照品溶液的配制
精密称量经
105
℃干燥至恒重的乌索酸标准品 0.0502g,置 100mL 的容量瓶中,加乙
醇溶解并稀释至刻度。摇匀即得
0.502mg/mL 的乌索酸对照品溶液。
1.2.2.2 标准曲线的建立
以乌索酸为对照品,分别取对照品溶液
0mL、1mL、2mL、3mL、4mL、5mL 至 25mL 的容
量瓶中,用乙醇稀释至刻度,采用紫外可见分光光度法在
546nm 处分别测定不同质量浓度
ρ(mg/mL)的乌索酸的吸光度。得出标准曲线方程为 A=7.19ρ- 0.0012,R2=0.9984。说明三
萜酸的质量浓度在
0.02 mg/mL~0.10mg/mL 范围内线性关系良好。
1.2.2.3 供试品溶液的配制
取上述
1.2.1 项下得到的粗三萜酸产品适量,用乙醇溶解后过滤,滤液至 100mL 容量
瓶中定容后,取
1mL 并稀释一定的倍数使其浓度在线性范围内。该溶液即为供试品溶液。
1.2.2.4 总三萜酸得率的计算
以供试品溶液测得的吸光度,代入乌索酸标准曲线方程计算出供试品中三萜酸的质量