摘要：利用

PCR 技术扩增了酿酒酵母（ Saccharomyces cerevisiae）

Ⅲ号染色体上以

ARS（Autonomously replicating sequence，ARS）305 为核心的不同长度侧翼序列，并将其

构建到酵母整合型载体

pRS405 中获得了重组质粒 PA500、PA1000、PA2000，然后通过电转化

法转入酿酒酵母细胞中，测定了不同

ARS305 片段对酵母转化效率及质粒在酵母中稳定性。

结果表明，并非侧翼序列越长

ARS 活性越高，重组质粒 PA1000 具有比 PA2000 更高转化频

率和转化稳定性，推测

ARS 两侧序列存在一些顺式和反式的调控机制影响 ARS 自主复制功

能。

 

　　关键词：酿酒酵母（

Saccharomyces cerevisiae）；ARS305；重组质粒；复制起始活性 

　　中图分类号：

Q78 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）19-4804-03 

　　真核生物染色体中存在多个复制起始位点，能够使真核生物巨大的基因组在较短时间

内完成复制。酿酒酵母（

Saccharomyces cerevisiae）的复制起始位点称为自主复制序列

（

Autonomously replicating sequence，ARS），首次在酿酒酵母的 TRPI 基因紧密连锁 DNA

序列中发现，含有

ARS 的质粒转化酵母后能独立存在于宿主染色体外且能自主复制[1]。此

后，

Irene 等[2]从酿酒酵母

Ⅲ号染色体中共发现有 19 个 ARS，约为 150 bp，其中含有一段 11 

bp 富含 A/T 的保守序列 ACS[5′-（A/T）TTTA（T/C）（A/G）TTT（A/T）-3′]。然而含有保

守序列

ACS 的不同片段在 ARS 活性方面却表现出明显的差异，部分活性高的 ARS 却没有

ACS 保守序列[3]。说明 DNA 复制起始功能不仅由 ACS 保守序列决定，还需核心序列 3′和 5′

侧翼序列的参与。

 

　　在酵母遗传工程中，不考虑载体

-宿主系统的类型、外源基因产物的性质和工程菌的培养

条件等因素，重组质粒的稳定性可以从功能上鉴定复制起始位点的活性。通过

DNA 重组技

术将可能含有

ARS 的 DNA 片段构建到缺失复制起始位点的质粒后转入细胞，如果它有较高

的细胞转化率并且表现为遗传不稳定性，就表明该片段在宿主菌中可能有复制起始位点活

性

[4]。本研究扩增了以 ARS305 为核心的不同长度侧翼序列，并将其构建到酵母整合型载体

pRS405 中，通过电转化法转入酿酒酵母细胞中，测定了不同 ARS 片段对酵母转化效率及质

粒在酵母中稳定性，为后续以酵母作为模式生物研究真核基因的复制与转录机制提供了参

考。

 

　　

1 材料与方法 

　　

1.1 材料 

　　

1.1.1 菌株和质粒 Esherichia coli DH5α 为内蒙古科技大学生物工程与技术研究所基因工

程实验室保藏。酿酒酵母

YPH499（MATα ura3-52 lys2-801 anber ade2-101 ochre trp1-Δ63