常用免疫组织化学染色方法

( 一)、ABC 法：(注，下面各种方法，均为手工操作，如没

特别说明，均在室温下进行)

1.切片经二甲苯

Ⅰ 5 分钟。

2.切片经二甲苯

Ⅱ 5 分钟。

3.无水酒精

Ⅰ 30 秒。

4.无水酒精

Ⅱ 30 秒。

5.95%酒精

Ⅰ 30 秒。

6.95%酒精

Ⅱ 30 秒。

7.90%酒精 30 秒。

8.80%酒精 30 秒。

9.70%酒精 30 秒。

10.自来水洗。(后面的切片脱蜡至水一般都是 1-10)

11.0.3%H2O2 甲醇处理切片 10-20 分钟。

12.水洗。

13.抗原修复。

14.PBS 洗 3 次，1 分钟/次。

15.加入血清孵育 20 分钟。

16.摔干血清，加入一抗 60 分钟。 

17.PBS 洗 3 次，2 分钟/次。

18 加入二抗孵育 30 分钟。

19.PBS 洗 3 次，2 分钟/次。

20.加入 ABC 复合物，孵育 30 分钟。

21.PBS 洗 3 次，2 分钟/次。

22.DAB-H2O2 孵育切片 5-10 分钟。

23.PBS 洗，水洗。

24.Harris 苏木素染核 5-10 分钟。

25.水洗，分化，蓝化，脱水，透明并封固。

(二)、LSAB 法。(SP 法)(Labelled streptavidim biotln)

1.切片脱蜡至水。

2.0.3%H2O2 甲醇处理切片 10-20 分钟。

3.水洗。

4.抗原修复。

5.PBS 洗 3 次，1 分钟/次。

6.加入血清孵育 10 分钟。

7.摔去血清，加入一抗孵育 30-60 分钟。

8.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。加入二抗，孵育 20 分钟。

9.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。

1