摇床(上海博讯)、隔水式恒温培养箱(上海博讯)、洁净工作台(上海博讯)及灭菌锅(上海三

申)等.

2.2 主要溶液及培养基

土壤初步驯化营养液由 5 g 葡萄糖、1 g 磷酸二氢钾、2 g 尿素、10 g 联苯和 10 L 蒸

馏水配制.

用 5.0 g 牛肉膏、10.0 g 蛋白胨、5.0 g NaCl、1000 mL 蒸馏水，在 pH=7.0 条件下配

制富集培养基;固体培养基再加入 15 g · L-1 的琼脂，121 ℃灭菌 30 min 备用.

用 0.5 g 磷酸氢二钾、0.5 g 磷酸二氢钾、1.0 g 硫酸铵、0.2 g 硫酸镁、0.1 g 氯化钙、

0.2 g 氯化钠、1000 mL 蒸馏水，在 pH=7.0 条件下配制无机盐培养基(MSM);固体培养基再加

15 g · L-1 的琼脂，121 ℃灭菌 30 min 备用.

2.3 多氯联苯降解菌的筛选及鉴定驯化

2.3.1 降解菌初步驯化、分离

采用规格为 30 cm×30 cm ×20 cm 的自制有机玻璃盒作为初步驯化装置，底层铺有高

度约为 2 cm 的沙层，沙层上铺 2 cm 砾石，砾石层上铺有约 8 cm 取自某化工厂的有机污染

土壤.定期加入含有联苯浓度为 1000 mg · L-1 的初步驯化营养液，定期翻动土壤，保持一

定的土壤湿度，并控制土壤 pH 值在 6.5～7.5 之间，驯化 1 个月.取上述初步驯化过的土壤

1 g，50 mL 灭菌液体富集培养基，装入 100 mL 的三角瓶中，在 30 ℃、150 r · min-1 条

件下振荡培养.待培养液发生浑浊时，在富集培养基上划线分离出单菌落.

2.3.2 降解菌强化驯化、分离

挑取上述分离出的单菌落，50 mL 含有一定浓度 PCB77 的灭菌 MSM，装入 100 mL 的三角

瓶中，在 30 ℃、150 r · min-1 条件下振荡培养，每 5～7 d 转接 1 次，在相同条件下进

行传代培养 2 个月，并不断提高 MSM 中的 PCB77 的浓度，驯化菌株对 PCB77 的降解能力.取

驯化培养得到的菌悬液，在固体 MSM 上划线分离纯化，筛选出对 PCB77 有较高降解能力的菌

株，将该降解菌株保存于试管斜面上，4 ℃冷藏保存.

2.3.3 降解菌鉴定及理化性质测定

菌株测序委托上海生物工程有限公司完成，得到该细菌的 16S rDNA 序列.登陆 Genbank，

通过 Blast 数据库进行同源性比较，利用 MEGA5.0 软件，选用邻接法(Neighbor Joining)，

绘制该细菌的系统发育树.参考《常见细菌系统鉴定手册》、《伯杰氏系统细菌学手册》和

相关文献进行形态和生理生化鉴定.