8

期

王立斌，等 . 人胎盘间充质干细胞的分离与鉴定

选取处于指数生长期的第三代及冻存复苏后正

常生长中的胎盘间充质细胞，用 0. 25% 胰蛋白酶
消化后，收集细胞悬液于离心管中，调整细胞浓度
为 1 × 10

5

·μL

－ 1

； 取 6 只试管，每管分别加 15μL

鼠抗人单克隆抗体 CD29 － PE、CD34 － PE、CD44 －
FITC、CD105 － FITC

，以 鼠 抗 人 IgG2a － FITC、

IgG1 － PE

作为阴性对照，再分别加入 150μL 细胞

悬液混匀，室温避光放置 10min，之后再用 PBS 洗 2
次，流式细胞仪检测，Cellquest 软件获取与分析。

1. 2. 4

胎盘间充质细胞染色体核型分析 用秋水

仙素 （ 终浓度为 0. 05μg·mL

－ 1

） 分别处理第二代

和第十四代的胎盘间充质细胞 2h 后收集细胞，用

0. 075mol· L

－ 1

的 KCl 溶 液 5mL 低 渗 处 理 细 胞

30min

，固定、制片。将制片标本置 65℃ 烘烤 3h，室

温存放 3 ～ 7d。37℃ 0. 25% 胰蛋白酶溶液中预处
理 10 ～ 20s，然后用 GKN 液和自来水依次漂洗数
秒，立即用 Giemsa 染液染色 10 ～ 15min，封片，显微
镜下观察并作染色体核型分析。

2

结果

2. 1

胎盘间充质细胞的分离及传代培养 实验结

果表明通过用 CollagenaseIV 和 DispaseII 消化能够
得到较均一的胎盘间充质细胞。倒置相差显微镜
下观察，原代细胞接种 48h 后，大部分细胞贴壁，形
态为典型成纤维细胞样，以长梭形为主，大量细胞
呈涡旋状生长，未贴壁细胞圆而亮 （ 图 1 － A） 。培
养 10d 左右，可见细胞克隆显著增多并融合成片，
即可进行传代。传代培养的细胞接种 2 ～ 4 h 即可
贴壁。传代初期细胞形态以长梭形成纤维细胞为
主，长满后细胞出现接触抑制不再增殖（ 图 1 － B） 。
随着培 养 世 代 增 加，细 胞 群 体 增 殖 速 度 有 减 缓
趋势。

A

： 原代胎盘间充质细胞（ × 200）

B

： 第十八代细胞图（ × 200）

图 1 胚胎间充质细胞的分离培养结果

2. 2

胎盘间充质细胞干细胞特异性抗原的鉴定

为了进一步鉴定胎盘间充质细胞的干细胞特

性，我们对胎盘间充质细胞进行了干细胞特异性表
面抗原的鉴定。利用流式细胞仪对胎盘间充质细
胞表面分子 CD29、CD44、CD105 进行分析，结果表

明，胎盘间充质细胞表达 CD29、CD44、CD105 等间
充质干细胞表面标志，证明其具有间充质干细胞特
性（ 图 2） 。

A

： 阴性对照．

B

： CD29 检测结果．

C

： CD44 检测结果．

D

： CD105 检测结果

图 2 流式细胞仪对胎盘间充质细胞干细胞

特异性抗原的分析

2. 3

胎盘间充质细胞染色体核型分析

对连续培养的第二代、第十八代细胞进行染色

体核型分析，结果显示，人胎盘间充质细胞在继代
培养过程中细胞遗传稳定性和染色体核型均保持
正常，未见遗传变异（ 图 3） 。

A

： 第二代细胞染色体核型

× 400

B

： 第十八代细胞染色体核型

× 400

图 3 胎盘间充质细胞染色体核型分析

3

讨论

胎盘是由胚胎的胚膜和母体子宫内膜联合长

成的母子间交换物质的过渡性器官，其中除含有滋
养细胞外，还含有大量血管及间充质成分。胎盘间
充质干细胞是近年来新发现的从胎盘获取的一类
干细胞，与从脐带血或骨髓中提取的干细胞相比
较，不但可提取干细胞数量多，而且可分化成更多
种类的组织细胞

［3］

。

研究人员从细胞表面抗原分

析发现，胎盘间充质干细胞是介于胚胎干细胞和成

·

5

6

8

·