安徽医药Ａｎｈｕｉ

Ｍｅｄｉｃａｌ

ａｎｄ

ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＪｏｕｒｎａｌ

２０１０

Ｊａｎ；１４（１）

・１Ｉ１・

ＮＡ来证实肿瘤细胞的存在，是目前公认的检测微转移最敏

感且高特异性的方法，敏感度为ｌ：１０７。有ＰＣＲ，ＲＴ．ＰＣＲ，巢

式或半巢式ＰＣＲ及特异性与敏感性更高的实时定量ＰＣＲ等

方法。但由于ＰＣＲ的极度敏感性，影响检测基因的因素多，

对标本的选择、采集与处理不同以及肿瘤细胞的异质性等原

因，仍有许多不可避免的假阳性与假阴性存在。

４肿瘤微转移的基因标志物

主要有（１）异常基因：染色体的异常重组、基因点突变、

基因缺失等，正常组织一般不伴有这些改变。检测相关特异

性基因可诊断微转移，如ｐ５３、ｃ・ｅｒｂＢ－２等。（２）肿瘤特异性标

志物：指在肿瘤细胞中存在而在正常细胞中不存在，如ＣＥＡ、

ＡＦＰ。（３）转移特异性基因：肿瘤转移中常伴随某些基因改变

或缺失，通过检测可提示转移情况和判断预后，如ｒｉｍ２３基

因。（４）肿瘤伴随的病毒：某些病毒可能导致肿瘤，检测到病

毒基因或其基因产物可协助诊断肿瘤及微转移，如人乳头状

瘤病毒、Ｔ细胞白血病病毒等。（５）组织特异性标志物：指在

肿瘤起源组织中存在，而在其它组织中不存在，如角蛋白８、

１９、２０（ＣＫ８、ＣＫｌ９、ＣＫ２０）等。国内外文献报道中检测微转移

最多的基因标志物是细胞角蛋白家族中的ＣＫｌ９。近年来，许

多学者采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测妇科恶性肿瘤患者ＣＫｌ９

ｍＲＮＡ

的表达，以判断微转移的存在，现已成为研究的热点。（６）癌

基因：Ｈａｇｅｍａｎｎ等¨引在宫颈癌患者的淋巴结微转移中发现

ＡＫＴ（丝氨酸苏氨酸激酶），Ｂｃｌ２（细胞凋亡抑制基因），ＭＭＰ３

（基质金属蛋白酶３），ＭＭＰ９（基质金属蛋白酶９），等。这些

关键的基冈在多种肿瘤中高表达，且与预后密切相关。我们

可以把这些关键的基因做为基因治疗的靶点。

５

ＣＫｌ９

ｍＲＮＡ在诊断恶性肿瘤微转移中的应用

细胞角蛋白（ＣｅｌｌＲｅｒａｔｉｎ，ＣＫ）是分布于外胚层起源细胞

中的中间纤维丝。为细胞骨架的成分之一，已知ＣＫ至少包含

２０个成员。ＣＫｌ９就是其中一种亚型，在各种腺上皮和腺上

皮起源的恶性肿瘤中均有表达，但在正常外周血、骨髓组织、

淋巴结中则不表达，在上皮性肿瘤组织中表达稳定¨“。但因

肿瘤发生微转移时脱落的癌细胞数量少，且浓度低，使以往的

免疫组化、形态学等方法无法检测出存在于血液、骨髓、淋巴

结等处的微转移，随着分子生物学技术的发展，ＲＴ—ＰＣＲ法使

肿瘤微转移的检测成为可能。在乳腺癌、胃癌、肠癌、肺癌的

微转移中，ＣＫｌ９ｍＲＮＡ检测被广泛使用并具有高敏感性和特

异性。１４’”Ｊ。有研究报道，在胃肠道肿瘤、肺、乳腺肿瘤中，通

过ＲＴ．ＰＣＲ检测ＣＫｉ９、ＣＫ２０的转录与预后因素如期别、浸润

深度、淋巴结的转移等有关¨６’”Ｊ。ＭａｒｒａｋｃｈｉＲ等【ｌ引采用巢

式ＲＴ．ＰＣＲ及放免法联合检测８０例乳腺癌、８０例健康女性的

外周血ＣＫｌ９ｍＲＮＡ的表达及血清中ＣＹＦＲＡ２１．１（ＣＫｌ９的可

溶性片段）的浓度，结果表明ｃＹＦＲＡ２１－１与肿瘤的临床分

期、组织分化及ＣＫｌ９ｍＲＮＡ的表达有显著性差异，但ＣＹＦＲＡ

２１．１的表达与ＣＫｌ９ｍＲＮＡ的表达之间无相关性。故认为

ＣＫｌ９

ｍＲＮＡ适合用来作为检测肿瘤细胞外周血微转移的指

标，同时表明ＣＹＦＲＡ２１—１可以用来作为上皮性肿瘤ＣＫｌ９分

泌的指标之一，预测肿瘤的预后，但不能显示肿瘤的微转移。

６

ＣＫｌ９

ｍＲＮＡ在诊断妇科恶性肿瘤微转移中的应用

Ｖａｎ

Ｔｒａｐｐｅｎ等¨引采用实时定量ＲＴ－ＰＣＲ检测宫颈癌患

者淋巴结中ＣＫｌ９ｍＲＮＡ的表达。发现常规染色阴性的１５０

枚淋巴结中，６６枚检测到ＣＫｌ９的转录，微转移的检出率为

４４％。陈鲁等ｍ１采用ＲＴ．ＰＣＲ检测临床早期宫颈癌患者外

周血ＣＫｌ９ｍＲＮＡ的表达，结果２９１例肿瘤患者ＣＫｌ９阳性率

为１９．９３％（５８／２９１），妇科良性肿瘤和健康人阳性率均为０。

Ｚｅｍｅｒ等旧¨采用ＲＴ＿ＰｃＲ法，检测１８例子宫内膜癌和２３例

良性疾病子宫切除对照者的子宫内膜标本ＣＫｌ９、ＣＫ２０表达。

结果全部内膜癌标本ＣＫｌ９ｍＲＮＡ阳性，１７例内膜癌标本

ＣＫ２０

ｍＲＮＡ阳性（灵敏度９４．４％）；２１例对照者ＣＫ２０

ｍＲＮＡ

阴性（特异性９１．３％）。李春根等ｍ１应用巢式ＲＴ．ＰＣＲ检测

５ｌ例卵巢癌患者骨髓和卵巢良性瘤骨髓液及正常人周围血

液标本ＣＫｌ９ｍＲＮＡ及癌胚抗原（ＣＥＡ）ｍＲＮＡ的表达水平，

结果５ｌ例卵巢癌患者骨髓中ＣＫｌ９阳性率为５０．９８％（２６／

５１），ＣＥＡ

ｍＲＮＡ阳性率１７．６５％（９／５１）。患者骨髓标本结果

与正常对照组间差异有显著性。

７问题与展望

妇科恶性肿瘤的微小转移与患者的预后密切相关，微转

移的检测有很好的临床应用前景。微转移作为一个独立的预

后指标，其价值优于肿瘤分级和分期，对患者的治疗和预后至

关重要。尽管目前敏感性和特异性很高的基因标志尚存在说

法不尽相同甚至相反的报道，检测结果存在很高的假阳性与

假阴性，费用昂贵，检测费时，而使其ｌ临床意义还在迸一步探

索之中。但我们相信随着对微转移研究的逐渐深入，采用多

基因标志物联合检测，应用敏感性、特异性更高的方法，并采

用统一的检测标准，扩大样本量进行研究，最终达到妇科恶性

肿瘤早期诊断的标准，为改善妇科恶性肿瘤的的不良预后提

供可能性。

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