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发生。张雪梅等

[28]

发现，在

COX-2基因启动子区-1195G→A的多态性改变产生了一个c-MYB

转录因子结合位点，增强了

COX-2基因的转录活性。并且在中国人群的病例对照研究中证实

了

-1195G/A和启动子区的另一个单核苷酸多态-765G/C与食管癌的遗传易感性密切相关。有

研究

 

[26.27]

认为启动子区的

-765G/C是一个潜在的功能性位点，G→C的突变消除了一个Sp1结

合位点，但是产生了一个

E2F结合位点，进而导致环氧化酶2表达的增加或减少。另外，有

研究表明鼠类

COX-2基因的33’端非编码区含有一些调控序列，可以改变mRNA的稳定性以

及翻译效率

[29]

  ，因此这对于mRNA的降解、稳定和翻译很重要

[30]

。所以，

COX-2基因的3’

端非编码区的多态改变可能会改变调控因子的亲和力而影响

COX-2的表达，进而影响个体对

癌症（包括乳腺癌）的易感性

 

[31-33]

。

 

在本研究中，我们假设

COX-2基因的启动子区两个多态(-1195G/A、-765G/C)和3’端非编

码区的单核苷酸多态

(8473C/T)可能单独或/和联合与乳腺癌的遗传易感性有关。为了验证这

个假设，我们通过病例对照研究（

615例乳腺癌病例和643例频率匹配的无癌对照），对COX-2 

-1195G/A、-765G/C和8473C/T三个多态性与中国人群乳腺癌遗传易感性的关系进行研究。 

2．材料和方法 

2.1  研究对象 

研究包括

615例乳腺癌病例和643例频率匹配的无癌对照。病例为2004年1月至2005年3

月在江苏省人民医院、江苏省肿瘤医院、南京市鼓楼医院、东南大学附属中大医院收治的新

发乳腺癌患者。所有患者都为无亲缘关系的南京市及其周边地区汉族人群，经病理组织学确

诊。剔除标准包括既往癌症史，其他组织转移癌症和有既往放

⁄化疗史。对照是从江苏省社

区慢性非传染性疾病筛查的人群（共

10,500个对象）中随机挑选的，根据病例的城乡（城市

或农村）和年龄（

±5岁）分布进行频数匹配，为无乳腺肿瘤和其它肿瘤患病史的健康女性。

研究对象签署知情同意书后，由经过统一培训的调查员使用统一的调查表，对全部调查对象

进行面访问卷调查，内容包括一般情况、月经及生育史、与生殖相关的生活方式、环境暴露

史和一级亲属肿瘤家族史（父母、同胞和孩子）。调查后，每位研究对象提供

5ml的静脉血液

标本。

 

2.2  基因型检测 

染色体

DNA是从外周血白细胞中提取的,按照蛋白酶K消化然后酚－氯仿提取和乙醇沉

淀的标准程序。参照文献

[28,34]

设计

COX-2 -1195G/A、-765G/C  和8473C/T的扩增引物，序列

如 下

:  −1195G/A F, 5′-ccctgagcactacccatgat-3′, R, 5′-gcccttcataggagatactgg-3′;  −765G/C F, 

5′-tattatgaggagaatttacctttcgc-3′, R, 5′-gctaagttgctttcaacagaagaaat-3′; and8473C/T F, 
5′-gtttgaaattttaaagtacttttgat-3′, R, 5′-tttcaaattattgtttcattgc-3′. 20µlPCR扩增反应体系包括：约50 
ngDNA、12.5 pmol引物、0.1 mM dNTP、  1 × PCR buffer (50 mM KCl,10 mM Tris-HCl和0.1% 
Triton X-100, pH 9.0,) and 1 U Taq酶。8473C/T位点的MgCl

2

浓度是

1.8 mM，而−1195G/A和

-765G/C的是1 mM。PCR扩增循环包括95°C预变性5min，接着进入循环；95°C变性30s；然
后按

COX-2 -1195G/A、-765G/C  和8473C/T位点，分别以61°C、54°C及53°C退火40s;  接着

72°C延伸45s，2-4步骤循环35次后72°C延伸10min。分别用内切酶PvuII, HhaI和BclI (New 
England BioLabs, Beverly, MA)来辨别−1195G/A,−765G/C和8473C/T基因型。虽然一些基因型
缺失或者由于某些

DNA质量和⁄或数量问题导致分型失败，但是每个位点仍然达到了95%的

应答率。最终，本研究成功获得

601例乳腺癌病例和643例对照的三个多态性位点的所有基因