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临床与实验病理学杂志Ｊ

Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｐａｔｈｏｌ

２０１０

Ｊａｎ；２６（１）

ＤＮＡ核苷酸序列，通过碱基修饰导致基因表达的改变，并可

通过细胞分裂、增殖而遗传，导致乳腺癌形成的分子基础。

为研究乳腺癌形成的分子基础拓展了另一条道路。甲基化

的ＤＮＡ是突变热点及ＤＮＡ的异常甲基化可使抑癌基因

（髑Ｇ）的表达失活已被广泛接受。抑癌基因启动子区甲基

化可导致转录沉默而失活，故检测肿瘤及其前驱病变中的抑

癌基因启动子区甲基化状态可以探讨抑癌基因在肿瘤发生

中的作用。研究抑癌基因甲基化状况，有助于阐明乳腺癌发

生发展可能机制。下面介绍几种主要抑癌基因甲基化与乳

腺癌的关系。

２．１

ｐ１６

１９７６年初发现，定位于９ｐ２ｌ，全长８．５ ｋｂ有３个

外显子和２个内含子。ｐ１６是人类肿瘤中最常见的抑癌基

因，是细胞周期蛋白激酶抑制剂，它通过结合并抑制细胞周

期依赖的蛋白激酶ＣＤＫ４和ＣＤＫ６，使Ｒｂ磷酸化程度降低

来调控细胞通过Ｇ。期。在人乳腺上皮细胞（ＨＭＥＣ）中，ｐ１６

基因ＣｐＧ岛的逐步甲基化使其逐渐失活，从而促使ＨＭＥＣ

突破增生抑制期（Ｍ。），因此检测ｐ１６甲基化沉默有助于判

断乳腺肿瘤的发生。关于ｐ１６基因失活和甲基化的关系，在

肿瘤细胞系中研究很多。Ｗｏｎｇ等一１用甲基化特异聚合酶链

反应（ＭＰＣＲ）研究了ｐ１６基因ＣｐＧ岛中４７个ＣｐＧ双核苷酸

的甲基化状态，发现ｐ１６基因ＣｐＧ岛中３个不同区域的ＣｐＧ

双核苷酸初始甲基化与ｐ１６基因转录抑制，从而使ＨＭＥＣ

越过Ｍ０期有关，该现象支持ｐ１６基因启动子区域甲基化使

ｐ１６永久沉默这一假说。

２．２

ＢＲＣＡｌ

ＢＲＣＡＩ是乳腺癌及卵巢癌特异性抑癌基因，

定位于１７ｑ２１，迄今为止，ＢＲＣＡｌ在散发性乳腺癌中尚未发

现体细胞突变，仅在极少量的散发性卵巢癌中发现突变。

并且在很多情况下，散发性乳腺癌ＢＲＣＡ！基因序列完整，但

ｍＲＮＡ水平却下降。提示在散发性乳腺癌中ＢＲＣＡＩ除基因

突变和杂合性丢失（１

ｏｓｓ

ｏｆ

ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｓｉｔｙ，ＬＯＨ）外尚有其他

机制。研究发现ＤＮＡ甲基化可能是ＢＲＣＡＩ在散发性乳腺

癌中表达下降或缺失的一种机制。Ｅｓｔｅｌｌｅｒ等¨州在８４例无

选择性原位乳腺癌组织中检出ｌｌ例（１３％）ＢＲＣＡｌ基因异

常甲基化，且与髓样癌、黏液腺癌组织分型相关。Ｓｈｏｗａ

等¨¨报道ＢＲＣＡＩ基因启动子甲基化与乳腺癌分级有关，

ＢＲＣＡＩ基因启动子甲基化使该基因失活，导致乳腺癌患者

恶性程度高。此外，由于甲基化的胞嘧啶可自发的脱氨基而

突变为胸腺嘧啶，因此异常甲基化是家族性乳腺癌中

ＢＢＣＡｌ突变的重要机制。

２．３

１４－３－３盯基因

１４－３－３

ｏｒ抑癌基因（也叫ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ

ｍａｒｋｅｒ，ＨＭＥｌ）定位于ｌｐ３５，它的主要功能是参与ＤＮＡ损伤

后修复，使细胞周期停滞于Ｇ：期，是负责Ｇ：细胞周期检查

点的基因家族成员为ＣＤＫ抑制因子。随着表观遗传学研究

的深入，发现基因启动区甲基化是１４－３－３ｔｒ基因失活的主要

机制之一。在原发性膀胱癌、结肠癌和乳腺癌中１４－３－３ｃｒ基

因表达下调．原因是该基因第一外显子区高度甲基化，而不

是杂合型缺失、基因突变等。１４－３－３ ｏｒ抑癌基因改变与乳腺

癌的发生的关系极为密切。研究发现１４－３０ ｏｒ在乳腺癌中

有着较高的甲基化频率ｍ’１３】。Ｕｍｂｒｉｃｈｔ等［１４１发现乳腺癌变

过程中１４－３—３０基因启动子甲基化频率不同，２５例浸润性乳

腺癌病例２４例高甲基化。这些都表明在散发性乳腺癌中，

１４－３－３仃基因启动子甲基化改变是转录下降乃至失活的重要

原因。研究１４．３－３盯甲基化与其转录的关系，有助于阐明散

发性乳腺癌中抑癌基因失活的表观遗传机制。

２．４

ＲＡＳＳＦ

ＩＡ基因Ｒａｓ相荚区域家族ｌＡ（Ｒａｓ

ａｓｓｏｃｉａ－

ｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ ｆａｍｉｌｙ

１Ａ．ＲＡＳＳＦｌＡ）是２０００年发现的一种新型

候选抑癌基（ｔｕｍｏｒ

ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ

ｇｅｎｅ。ＴＳＧ）。近年来的大量

研究表明ＲＡＳＳＦＩ Ａ的失活在肺癌、乳腺癌、胃肠道肿瘤等多

种实体瘤的发生、发展中起着重要作用。由于３ｐ２１．３区域

等位基因缺失（ａｌｌｅｌｉｅ ｌｏｓｓ）的现象，提示这一区域可能含有

抑癌基因，对多种肿瘤的发生都能起到抑制作用。Ｄａｍｍａｒｍ

等¨纠通过甲基化特异性聚合酶链反应（ｍｅｔｈｙｌａｔｌｏｎ

ｓｐｅｃｉｆｉｃ

ＰＣＲ，ＭＳＰ）分析发现５种细胞株中ＲＡＳＳＦＩＡ基周均发生了

启动子区域ＣｐＧ岛的异常甲基化，而突变分析则未发现

ＲＡＳＳＦｌＡ基因的突变。应用适当浓度的甲基化抑制剂５－氮

杂－２’一脱氧胞苷（５－ａｚａ－２＇－ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ，５－Ａｚａ—ｃｄＲ）处理上

述细胞株，４天后可以观察到ＲＡＳＳＦＩＡ的重新表达，提示异

常甲基化是乳腺癌中ＲＡｓＳｎＡ失活的重要机制。Ｂｕｒｂｅｅ

等¨刮的研究也取得了类似的结果和结论。他们发现

ＲＡＳＳＦｌＡ在正常乳腺上皮细胞中１００％表达，而在６０％

（１５／２５）的ＨＴＢ和ＨＣＣ系列乳腺癌细胞株中则表达缺失。

可见异常甲基化导致的ＲＡＳＳＦｌＡ基因失活在乳腺癌的发生

中起着重要作用。

２．５

ＴＩＭＰ３基因ＴＩＭＰ３基因位于人类染色体２２ｑ１２．１－

１３．２上，编码一种组织金属蛋白酶抑制物３（ｔｉｓｓｕｅ

ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ

ｏｆｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ－３，ＴＩＭＰ３）的蛋白质。该蛋白在细胞外

合成后被分泌到细胞内基质中，具有抑制组织中的基质金属

蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａＵｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰｓ）的活性。ＭＭＰｓ是

一种细胞外基质降解酶，具有促进肿瘤生长、浸润和转移的

作用。因此，肿瘤中或其周围组织内的ＭＭＰｓ和ＴＩＭＰ３失去

平衡（ＭＭＰｓ增加或ＴＩＭＩ）３减少）将可能导致和促进肿瘤浸

润和转移。在乳腺癌中，ＴＩＭＰ－３的表达缺失与其启动子区

域的甲基化程度增高有关，而正常乳腺组织却未发现ＴＩＭＰ．

３基因甲基化。杨举伦等¨列的研究结果显示，在ＭＣＦｌ０模

型的增生细胞系、癌前细胞系、导管内癌细胞系、浸润癌细胞

系和转移癌细胞系中，ＴＩＭＰ３基因启动子区均呈高度甲基化

状态，提示ＴＩＭＰ３基因失活不仅在乳腺癌的浸润中起作用，

而且在乳腺癌的发生中起作用，可能是早期诊断乳腺癌和判

断乳腺癌预后的潜在分子生物学标记。

２．６

ＡＰＣ基因结肠腺瘤性息肉病基因（ａｄｅｎｏｍａｔｏｕｓ砌．

ｙｐｏｓｉｓｃｏｌ，ｉ

ＡＰＣ）是１９８６年发现的抑癌基因位于人类染色体

５ｑ２ｌ上，长约９００ ｋｂ，开放读码区８

５３５

ｂｐ，由１５个外显子

组成，编码由２ ８４３个氨基酸组成的相对分子质量为３×１０５

的蛋白质。研究发现，ＡＰＣ基因启动子ｌＡ高度甲基化及其

所致的转录沉默不仅存在于结直肠腺瘤、散发性结直肠腺癌

及癌旁组织中，也存在于遗传性乳腺癌、散发性乳腺癌及部

万方数据