一、
实验原理
超氧化物歧化酶
(superoxide dismutase,SOD)在生物体内广泛分布,能催化超氧
阴离子自由基
(O2-.)发生歧化反应,从而清除氧自由基,起到防御氧毒、抗辐射、抗衰老等
作用。
目前因
SOD 来源不同测活方法非常多,但是所测酶活结果相差较大、活性单位也不统
一。因此,本方法是针对植物型
SOD 对肾上腺素自氧化法的各种影响因素进行了研究, 建
立一种微量、快速、稳定重复性好且适用于植物来源的
S O D 测定方法。
因植物来源的
SOD 成分比较复杂,且有微量的多酚抗氧化物成分。肾上腺素是多酚衍
生物,在碱性条件下会自动氧化,其中涉及到
(O2-.)的链式反应,可被 SOD 抑制,肾上腺
素经多步转化为肾上腺素红。肾上腺素红有
480 nm 和 320nm 两个吸收峰。325 nm 处的
吸收更能灵敏地反映自氧化程度。当
pH>10.2,线性范围缩短,pH 值越高线性范围越
小
;pH<10.2 时吸光度值极小,易带入误差。pH10.2 维持着良好的线性段,而且斜率适中,
可作为实际应用中的最佳
pH。温度在 30℃左右,线性关系较好。随着肾上腺素浓度的增加,
自氧化速率增大,线性范围增加,当肾上腺素浓度为
0.4 mmol/L 使每 1 min 自氧化速率
达
0.070,提高了灵敏度、减少了误差。
二、
实验材料及用具
1、实验试剂