取碱性蛋白酶菌种发酵液于离心管内，

4000r/min 离心 20min 取上清液,采

用

Folin 酚法测定碱性蛋白酶活力酶活力[5]。

酶活力单位定义为：在温度

55℃ pH10.0 的条件下，1min 水解酪素产

生

1μg 酪氨酸所需酶量定义为1 个酶活力单位，以U 表示。

                            A680*K*n*4

        样品的酶活力(U/ml) ———————————

＝

                                   10

式中：

A-- 样品平行实验的平均吸光度

K--吸光常数

4 --反应试剂的总体积(ml)

 10 --反应时间(min )

 n --稀释倍数

1.2.2  不同无机盐对枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶粗酶的影响

无机盐分别选用

0.02% Na2HPO4、0.02% KCl、0.02% K2HPO4、0.02% 

NaCl，以不加无机盐为对照组，在其他条件不变的情况下，以酶活力为指标，

确定最佳无机盐。

1.2.3 发酵罐发酵

1.2.3.1 种子培养：在无菌条件下自斜面菌种一环菌体，接入装有 50ml 种子
培养基的

250ml 三角瓶中，在 32℃振荡培养 12-16h。

1.2.3.2 发酵前的准备：发酵培养基的配制，电极的标定及发酵罐的实消
1.2.3.3 接种：将浸有酒精的脱脂棉围绕在接种口周围，点火打开接种口，将
种子培养液注入。接种量为

3.5%，盖好接种口，调节搅拌转速至所需数值，培

养开始。
1.2.3.4 发酵过程控制：控制过程基本参数的记录（种子液 OD600，PH,Do,
温度），

发 酵 过 程 直 接 参 数 记 录 （

PH,Do, 温 度 ， 转 速 ） 及 离 线 参 数 记 录

（

OD600，酶活，PH 值）

1.2.3.5 粗酶液分离：继续发酵后将发酵液离心（3500r/min，15min）收集
上清液保存，收集离心沉淀进行灭菌处理。
1.2.3.6 清洗发酵罐，空消，结束发酵过程。

2 结果与分析