１．１．２原料新鲜生豆粕（购自东海粮油）。

 

　　１．１．３菌株及培养基枯草芽孢杆菌Ｐ１～Ｐ１０，ＰＤＡ培养基（含蔗糖）。

 

　　１．２试验方法

 

　　１．２．１降解大豆抗原枯草芽孢杆菌的筛选

 

　　１）试验菌种的准备。将枯草芽孢杆菌Ｐ１～Ｐ１０菌株分别接入ＰＤＡ斜面活化，再
分别转接入ＰＤＡ液体培养基中，在３７

℃摇床中培养１８ ｈ作为液体菌种备用。 

　　２）豆粕发酵试验。称量豆粕３０

 ｇ，将Ｐ１～Ｐ１０菌株以５％和２％的接种量分

别接入生豆粕中，加３０

 ｍ L 水混合均匀。将以上混合物装入５００ ｍ L 阔口罐头瓶，并

用塑料薄膜封好，３７

℃恒温箱中静置发酵。 

　　３）发酵样品抗原蛋白残留率测定。将未发酵豆粕及Ｐ１～Ｐ１０菌株发酵的豆粕样品
在５０

℃烘箱中烘干。每种样品各称取１．００ ｇ，加入２０ ｍ L ０．０３ ｍｏｌ／Ｌ的

Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ抽提缓冲液研磨匀浆［３］，修正各样品ｐＨ值为８．０，浸泡１

 ｈ后

离心（转速８

 ０００ ｒ／ｍｉｎ，时间１０ ｍｉｎ）去渣，调节上清液ｐＨ值为４．５，

离心（转速

 

　　１０

 ０００ ｒ／ｍｉｎ，时间１５ ｍｉｎ），干燥称重即为各样品中抗原蛋白的质

量，抗原蛋白的残留率按下式计算：

 

　　１．２．２Ｐ３菌株的豆粕发酵条件的初步研究

 

　　１）单因子试验。在温度为３７

℃，以接种量、料水比及ｐＨ值３个因素的不同水平发

酵大豆粕，测定各发酵样品的抗原蛋白残留率。

 

　　２）正交试验。在单因子试验的基础上，选取接种量、料水比及ｐＨ值各３个水平，再
设计正交试验，优化发酵条件，测定各发酵样品的抗原蛋白残留率。

 

　　２结果与分析

 

　　２．１降解大豆抗原蛋白枯草芽孢杆菌的筛选结果

 

　　表１结果显示，Ｐ１，Ｐ５，Ｐ６，Ｐ８，Ｐ９菌株发酵的样品中抗原蛋白的残留率
高，这些菌株降解抗原蛋白的能力较差。Ｐ２，Ｐ３，Ｐ４，Ｐ７，Ｐ１０菌株发酵的样品
中在５％的接种量下，抗原蛋白的残留率很低，这些菌株降解抗原蛋白的能力较强。其中Ｐ
３菌株在２％及５％的接种量下，抗原蛋白的残留率均达到最低，故Ｐ３菌株为降解大豆
抗原蛋白效果最好的菌株。

 

　　２．２Ｐ３菌株发酵条件初步研究结果

 

　　２．２．１接种量试验结果温度为３７

℃，料水比为１．０∶１．０，ｐＨ值为７．０

条件下，不同的接种量发酵生豆粕，测得不同发酵样品中抗原蛋白的残留率见表２。根据表
２，２％的接种量下，发酵样品的抗原蛋白的残留率较大，而４％～１０％的接种量下发
酵样品中抗原蛋白的残留率均大大降低，且差异不明显。

 

　　２．２．２料水比试验结果温度为３７

℃，接种量为４％，ｐＨ值为７．０条件下，

不同的料水比发酵生豆粕，测得不同发酵样品中抗原蛋白的残留率见表３。根据表３，料水
比为１．０

∶０．2、１．０∶０．４时，发酵样品中的抗原蛋白的残留率均较高；料水比为１．

０

∶０．６、１．０∶０．8、１．０∶1．0 时，发酵样品中抗原蛋白的残留率大为降低，且差异

不明显。

 

　　２．２．３ｐＨ值试验结果温度为３７

℃，接种量为４％，料水比为１．０∶０．６时，

在不同ｐＨ值下发酵生豆粕，测得不同发酵样品中抗原蛋白的残留率见表４。根据表４，ｐ
Ｈ值为６．５时发酵样品抗原蛋白的残留率最低。

 

　　２．２．

4 正交试验结果接种量、料水比及ｐＨ值三因子三水平正交试验结果见表５。

根据表５中极差Ｒ值大小，可以看出料水比对抗原蛋白的残留率影响最大；在４％～８％
的接种量范围内，接种量对发酵样品中抗原蛋白的残留率影响较小；ｐＨ值在６．０～７