］。而获得优良种子的主要因素包括选用合适的种子培养基及良好的种子培养条件。对Ｌ－
苏氨酸生产菌ＷＳ４００６－７Ｅ－ＮＵＴ－２１的种子培养基及部分培养条件进行了研
究，旨在为Ｌ－苏氨酸的工业化生产提供理论依据。

 

　　１材料与方法

 

　　１．１材料

 

　　１．１．１菌株Ｌ－苏氨酸产生菌ＷＳ４００６－７Ｅ－ＮＵＴ－２１为从江苏畜牧
兽医职业技术学院生物技术实验室保存的菌株ＷＳ４００６中分离诱变选育得到的菌株，
初步鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌（Ｓｔｅｎｏｔｒｏｐｈｏｍｏｎａｓ

 ｍａｌｔｏｐｈｉｌ

ｉａ）。

 

　　１．１．２培养基［４］基础种子培养基：葡萄糖４０

 ｇ／Ｌ，硫酸铵４ ｇ／Ｌ，玉

米浆３０

 ｇ／Ｌ，酵母膏５ ｇ／Ｌ，Ｋ２ＨＰ O ４ １ ｇ／Ｌ，ＫＨ２Ｐ０４ １ ｇ／Ｌ，

ＭｇＳ０４・７Ｈ２０

 ０．２５ ｇ／Ｌ，Ｆｅ２Ｓ O ４・７Ｈ２ O ０．０１ ｇ／Ｌ，Ｍ

ｎＳ

O ４・Ｈ２Ｏ ０．０１ ｇ／Ｌ，ｐＨ ７．０，１１５ 

℃灭菌１５ ｍｉｎ。发酵培养

基：蔗糖

 １００ ｇ／Ｌ，硫酸铵 ２０ ｇ／Ｌ，Ｋ２ＨＰ O ４ ０．５ ｇ／Ｌ，ＫＨ２Ｐ

O ４ ０．５ ｇ／Ｌ，ＭｇＳ O ４・７Ｈ２Ｏ ０．２５ ｇ／Ｌ，玉米浆 ２０ ｇ／Ｌ，Ｆ
ｅ２Ｓ

O ４・７Ｈ２Ｏ ０．０１ ｇ／Ｌ， 

　　１．２方法

 

　　１．２．１种子培养及苏氨酸发酵

①菌体斜面活化：取保藏培养基上保藏的菌种，挑

少许菌落接种到制备好的活化培养基斜面上，３０

 

℃培养４８ ｈ，使菌株达到最佳生长

状态。

②种子培养：在装有２５ ｍＬ种子培养基的２５０ ｍＬ摇瓶中，接种一环新鲜的活

化种子，８层纱布封口，于全温振荡器上３０

 

℃、１８０ ｒ／ｍｉｎ振荡培养１４ ｈ。③

发酵培养：在装有２５

 ｍＬ发酵培养基的２５０ ｍＬ摇瓶中，以１０％的接种量接种种子

培养液，８层纱布封口，置全温振荡器上３０

 

℃、１８０ ｒ／ｍｉｎ振荡培养７２ ｈ。④

用ｐＨ

 ６．４～８．０的精密ｐＨ试纸测定ｐＨ值。

⑤Ｌ－苏氨酸产量的测定采用纸层析

法［５］。

 

　　１．２．２正交试验优化种子培养基成分种子培养基的组成不同，会导致培养基中的
微量元素和其他营养成分含量发生变化，对菌体生长和产物形成的影响很大。选取种子培养
基的主要成分葡萄糖（Ａ）、玉米浆（Ｂ）、硫酸铵（Ｃ）、酵母膏（Ｄ）４个因素，每个因
素选取３个浓度水平，进行Ｌ９（３４）正交试验，优化种子培养基，每个试验组两次重
复，各因素及水平见表１。

 

　　１．２．３单因素试验优化培养条件设置单因素试验，分别考察种子培养基装液量、种
子接种量、初始ｐＨ值和种龄对菌株产Ｌ－苏氨酸产量的影响。

①种子培养基装液量：分别

取一环新鲜的活化菌种至装有１５、２０、２５、３０、３５

 ｍＬ种子培养基的２５０ ｍＬ三

角瓶中，于３０

 

℃、１８０ ｒ／ｍｉｎ振荡培养１６ ｈ后，转入发酵培养基中摇瓶发酵７

２

 ｈ后测定Ｌ－苏氨酸的产量；

②种子接种量：将活化菌种接种到试验①所得的最优种子

培养基装液量下培养１６

 ｈ后，分别以６％、８％、１０％、１２％、１４％的接种量接入发

酵培养基中发酵７２

 ｈ后测定Ｌ－苏氨酸的产量；

③种子液初始ｐＨ值：按照①、②优化后

的培养条件，将活化的菌种接种到ｐＨ值分别为６．４、６．７、７．０、７．２、７．５、７．
７的种子培养基中培养１６

 ｈ后，接入发酵培养基中培养７２ ｈ后测定Ｌ－苏氨酸的产量。

④种龄：取一环新鲜的活化菌种，接种于装有５０ ｍＬ种子培养基的２５０ ｍＬ三角瓶中，
振荡培养，每隔２

 ｈ取样０．５ ｍＬ，用无菌水稀释１０倍后，用７２２型紫外分光光度

计测定吸光度（ＯＤ５０８

nm），以时间为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制种子生长曲线；

取一环新鲜的活化菌种，按照

①～③所得的条件对活化的菌种进行培养，６～２２ ｈ期间

每隔２

 ｈ取种子液接种到发酵培养基中，３０ 

℃、１８０ ｒ／ｍｉｎ振荡培养７２ ｈ后