的应用需要不同纯度的

ｒｈＥＧＦ，中等纯度的ｒｈＥＧＦ

可以满足化妆品的使用要求．产品越纯，生产成本越
高．操作方便、成本低廉和产品纯度中等的

ｒｈＥＧＦ

纯化工艺能够降低价格，扩大应用，提高生产商的竞
争能力．现有的

ｒｈＥＧＦ纯化工艺基本上以生产高纯

度和医药用产品为目的，过程复杂、收率低下

［４］

，

所

以，开发满足化妆品使用要求的

ｒｈＥＧＦ纯化工艺非

常必要．当然，纯度低的

ｒｈＥＧＦ含有更多的异质蛋

白，而某些异质蛋白是色素，如果不经脱色处理，则
产品色泽深暗，其应用将大受限制．因此，对于中等
纯度

ｒｈＥＧＦ的脱色显得尤为重要，但是，迄今未见

相关的研究报道．

ｒｈＥＧＦ纯化工艺一般由离子交换、凝胶过滤、

亲和色谱和反相高效液相色谱等单元操作组
成

［４，５］

．

比较而言，离子交换具有收率高、产量大的

优势

［６］

．

本文报道应用离子交换技术所开发的、以生

产满足化妆品使用要求为目的的

ｒｈＥＧＦ纯化和脱

色工艺．

１　材料与方法

１．１　材　料

ｒｈＥＧＦ发酵液经离心、盐析和透析，所得透析

液的

ｒｈＥＧＦ质量浓度为１．３～１．６ｇ／Ｌ．

纯化用弱碱性离子交换树脂选用

ＤＥＡＥＳｅｐｈ‐

ａｄｅｘ‐Ａ５０（瑞典ＡｍｅｒｓｈａｍＰｈａｒｍａｃｉａ公司）．脱色

用弱碱性离子交换树脂选用

Ｄ３１４（杭州争光树脂有

限公司）．

离子交换树脂用二次蒸馏水冲洗，再用２倍体

积的乙醇浸泡２～３

ｈ，同时不断地搅拌，以除去杂

质并使之完全溶胀．用二次蒸馏水冲洗至没有乙醇
的气味，然后缓慢地装入充满二次蒸馏水的玻璃柱
中，直至一定高度．

纯化和脱色过程在分别充填

ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘ‐

Ａ５０和Ｄ３１４，内径为１６ｍｍ的玻璃柱（以下分别简

称纯化柱和脱色柱）中进行．
１．２　ｒｈＥＧＦ浓度检测

采用双抗体夹心式酶联免疫吸附法定量检测

ｒｈＥＧＦ浓度

［１１］

，

试剂盒为

ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ公司的产品

（

ｈｕｍａｎＥＧＦＥＬＩＳＡＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔＫｉｔ，ＣａｔａｌｏｇＮｏ

９００‐

Ｋ０５）．

１．３　色度检测

因为色素的多样性和复杂性，迄今尚无专门的

色度检测方法．本文采用分光光度法，波长选择４３０

ｎｍ

［８］

，

色度为

Ｄ＝１．１４７ × １０

２

Ａ

４３０

　（

Ｒ

２

＝０．９９８３）

式中，

Ａ

４３０

为４３０

ｎｍ下的吸光度．

１．４　纯　化

一定量的

ｒｈＥＧＦ透析液进样到纯化柱，由含

ＮａＣｌ（０．５ｍｏｌ／Ｌ）的磷酸缓冲液（ｐＨ＝７．４）进行洗

脱．分段收集纯化洗脱液，检测其

ｒｈＥＧＦ浓度．比较

ｒｈＥＧＦ收率，考察纯化操作条件的影响．ｒｈＥＧＦ收

率计算式为

ＲＹ＝（ｒｈＥＧＦ浓度

纯化后

／

ｒｈＥＧＦ浓度

纯化前

） × １００％

１．５　脱　色

ｒｈＥＧＦ纯化洗脱液由脱色柱进行脱色．分段收

集脱色流出液，检测其色度和

ｒｈＥＧＦ浓度．比较脱

色率和

ｒｈＥＧＦ收率，考察脱色操作条件的影响．脱

色率计算式为

ＤＣ＝［（１－Ａ

４３０

脱色后

）／

Ａ

４３０

脱色前

］ × １００％

２　结果与讨论

２．１　纯　化
２．１．１　

流速的影响

当

ｒｈＥＧＦ透析液进样体积为８０．０ｍＬ、纯化柱

床高为１０．０

ｃｍ时，洗脱液流速对ｒｈＥＧＦ收率的影

响如图１所示．洗脱液流速快，

ｒｈＥＧＦ收率低，这说

明

ｒｈＥＧＦ与ＤＥＡＥＳｅｐｈａｄｅｘ‐Ａ５０的离子交换容

易而快速．低流速洗脱有利于

ｒｈＥＧＦ浓缩，但降低

生产效率，当洗脱液流速低于１５０．０

ｍＬ／ｈ时，

ｒｈＥＧＦ收率就高于８５％．

图１　纯化过程洗脱液流速对

ｒｈＥＧＦ收率的影响

２．１．２　

进样体积的影响

当洗脱液流速为１５０．０

ｍＬ／ｈ，纯化柱床高为

１０．０

ｃｍ时，ｒｈＥＧＦ透析液进样体积对ｒｈＥＧＦ收率

的影响如图２所示．进样体积小，离子交换容量相对
较大，富余的交换容量与透析液中的杂质发生作用，

・

２

・

浙江工业大学学报

第３３卷