化钠

(NaCl)，液体石蜡(白油)，异丙醇，Span-80，Tween-80，氯化钾(KCl)，磷酸氢二钠

(Na2HPO4)，磷酸二氢钾(KH2PO4)。试剂除注明外均为分析纯，实验用水为双蒸水。PBS 缓
冲液，参照《

中国

药典》

(2005 年版)配制，pH 值为 7.3[19]。熊果苷样品标准溶液，以 PBS 缓

冲液为溶剂，用熊果苷标准品配制浓度分别为

1,2,5,10,15,20,25 和 30μg/ml 的样品标准溶液。

　　

1.2 仪器分析天平，超声波细胞粉碎机，低速离心机，恒温振荡器，TP2A 型透皮扩散

实验仪，移液器

(100～1 000 μl)，真空干燥箱，磁力搅拌器，紫外分光光度计，倒置生物显

微镜、红外光谱仪。

　　

2 方法

　　

2.1 药物标准曲线的绘制使用紫外分光光度计，在 190～400 nm 波长范围对 20 μg/ml 浓

度的熊果苷样品溶液进行扫描，确定最大吸收波长

λmax。PBS 溶液作空白对照，于最大吸

收波长

λmax 处测定不同浓度 C 熊果苷样品标准溶液的吸收度值 A，以 A 对 C 作标准曲线。

　　

2.2 熊果苷/HA-ADH 微球的制备流程在浓度为 1mol/L 的 NaCl 溶液中溶解一定量的熊

果苷

[用量∶熊果苷/HA=1

∶10(g/g)]，配制浓度为 0.2%的 HA 水溶液(CHA)，待溶胀至均匀

透明后加入熊果苷

/NaCl 溶液，用 2.5 mol/L 的 NaOH 浓溶液调 pH 至 9。水相中，HA、熊果

苷

/NaCl 和 NaOH 溶液分别占 77%，20%和 2%。以液体石蜡为油相介质，加入乳化剂/油相

为

1/100(g/g)的复配乳化剂(Span-80

∶Tween-80=88∶12, V/V)。以水相和油相 W/O=1/4(V/V)配

成

240 ml 浊液，加入浓度为 0.1%、占水相体积 1%的 ADH 溶液，经 400 W 声波乳化，工作

时间

10 s×90 次，间歇 10 s。用磁力搅拌器搅拌 4 h 待交联反应基本充分。静置至产物分层，

取水相层上方白色乳浊液用异丙醇少量多次洗涤，真空干燥箱中干燥至恒重备用

[20，21]。

制备流程见图

3。图 3 熊果苷/HA-ADH 微球的制备流程

　　

2.3 熊果苷/HA-ADH 微球的表征

　　

2.3.1 熊果苷/HA-ADH 微球的表观形态观察将熊果苷/HA-ADH 微球乳液滴在载玻片上

成单层，

自然

烘干，

400×镜下和 1000×油镜下观察微球形态并拍照。

　　

2.3.2 红外光谱分析将干燥的熊果苷原粉、HA-ADH 空白微球及熊果苷/HA-ADH 微球研

磨成粉末，通过

KBr 压片法制成薄片，用傅立叶红外光谱仪测定产物的红外图谱，分辨率

为

4cm-1，扫描 16 次，进行图谱比较。考察活性组分与聚合物之间的相互作用。

　　

2.4 载药量和包封率的测定采用酶解法处理样品，按加入乙醇后的酶解体积推算熊果苷

浓度测定值。按式①和式②

计算

微球的载药量

(DL%)和包封率(LE%)。微球载药量(%)=微球

中药物的质量微球的质量

×100%

① 微球包封率(%)=微球中药物的质量投药总质量×100%②

　　

2.5  熊果苷/HA-ADH 微球的释药性能取负载有活性组分的多孔微球 0.5g，用适量

pH=7.3 的 PBS 缓冲液分散后，采用 TP2A 型智能透皮仪测定载药微球释放的活性物浓度。
弃去每次取出的溶液，然后向接收池中补充等量的新鲜磷酸盐缓冲液，以维持接收介质的
体积不变。活性物的释放持续

10 h，按时间间隔和累积释放百分比得到活性物的释放曲线。

按式③计算累积释放率：累积释放率

(%)=(∑ni=1V×Ci/W)×100%

③ 式中 Ci 为释放介质中活

性物的浓度

(mg/ml)，V 为每次取样的体积，针对本文为 10 ml，W 为总的载药量(mg)。