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-
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/)01
2)01
2)01
2)01
2)
*
A 土牛膝摇 B 岗梅摇 C 南板蓝根摇 D 腺苷对照品
图
1摇 药材水煎液 HPLC 图谱
Fig. 1摇 HPLC chromatograms of the water decoction of compound Achyranthes aspera
2. 2. 2摇 样品溶液的制备摇 称取土牛膝、岗梅根和南板
蓝根等药材适量
,共 9 份。 按表 2 正交试验 1 ~ 9 号条
件提取
,过滤,浓缩至 1 mL 含 1. 5 g 原生药材的供试
液
。 将 9 份供试液平均分成两份,一份直接测定总腺
苷含量
,另一份作醇沉处理,先加 95% (渍)乙醇使之含
醇量约
50% ,放置 24 h,离心取上清液,上清液再加
95% (渍)乙醇使之含醇量达 80% ,放置 24 h,离心取上
清液
,上清液浓缩至每 1 mL 含 1. 5 g 原药材的供试液
后测定总腺苷含量
。
2. 2. 3摇 指标测定方法摇 干膏得率测定:定量取“2. 2.
2冶项下的 1 ~ 9 号供试液各 10 mL,于已恒重的蒸发皿
中
,水浴蒸干,置(80 + 1)益 的烘箱中干燥至恒重,取出
放置干燥器中
0. 5 h,精确称重,计算干膏得率,结果见
表
2。
总腺苷含量的测定
:高效液相色谱测定总腺苷的
含量
[2]
。 色 谱 条 件: DiamonsilTM ( 钻 石) C
18
色 谱 柱
(250 mm 伊 4. 6 mm);甲醇鄄pH6. 5 磷酸盐缓冲液(体积
比
7颐 93)为流动相;柱温为 35 益 ;流速 1. 0 mL/ min;检
测波长
260 nm;进样量:10 滋L。 结果见表 2。
表
2摇 正交设计实验结果
Tab. 2摇 Results of orthogonal test
试验
号
A
B
C
干膏
得率
/
%
籽/ (滋g·mL
- 1
)
总腺苷
醇沉后
总腺苷
1
1
1
3
10. 23 85. 72 77. 89
2
1
2
2
9. 266 73. 11 65. 58
3
1
3
1
5. 925 63. 61 62. 14
4
2
1
2
8. 957 84. 42 78. 71
5
2
2
1
7. 237 61. 94 61. 32
6
2
3
3
9. 137 87. 19 79. 98
7
3
1
1
6. 935 68. 09 66. 72
8
3
2
3
9. 582 84. 45 78. 44
9
3
3
2
8. 469 80. 73 78. 03
K
1
8. 474 8. 707 9. 650
干膏 K
2
8. 444 8. 695 8. 897
得率 K
3
8. 329 7. 844 6. 699
R 0. 145 0. 8637 2. 951
K
1
74. 147 79. 41 85. 78
总腺苷 K
2
77. 85 73. 167 79. 42
含量 K
3
77. 757 77. 177 64. 547
R
3. 61
2. 233 21. 24
2. 2. 4摇 方差分析摇 干膏得率及总腺苷含量的方差分
析结果见表
3 及表 4。
表
3摇 干膏得率方差分析
Tab. 3摇 Variance analysis of the yield of extracts
方差来源 离差平方和 自由度
均方
F
显著性
A
0. 03515
2
0. 17575 0. 096206 P > 0. 05
B
1. 470841
2
0. 73542
4. 0257
P > 0. 05
C
14. 10511
2
7. 052554 38. 60577 P < 0. 05
误差
0. 365363
2
0. 182681
表
4摇 腺苷含量方差分析
Tab. 4摇 Variance analysis of adenosine content
方差来源 离差平方和 自由度
均方
F
显著性
A
26. 7554
2
13. 3774 7. 197452 P > 0. 05
B
60. 0470
2
30. 02354 16. 15317 P > 0. 05
C
712. 888
2
356. 444 191. 7729 P < 0. 05
误差
3. 71735
2
1. 858678
摇 摇 表 2 直观分析与表 3 表 4 方差分析的结果表明,
对提取有效成分影响最大的因素是煎煮次数
,最佳工
艺为
A
2
B
1
C
1
,即加 8 倍水,煎煮 1. 5 h,煎煮 3 次。 同
时
,从表 2 可知用醇沉法处理后,总腺苷的含量无显著
减少
。
2. 2. 5摇 醇沉法与吸附澄清法纯化有效成分的比较
[3]
摇 按上述最佳工艺制备每 1 mL 含 1. 5 g 原生药材的
供试液
,平均分成两份。 一份用醇沉法进行处理,乙醇
的用量见
“2. 2. 2冶;一份加 1% (渍)壳聚糖溶液作为澄
清剂处理
,加入后使壳聚糖的质量分数达 0. 1%
[4]
。
结果用醇沉法处理的样品总腺苷的含量为
89. 24 滋g /
mL,用壳聚糖作澄清剂处理的样品总腺苷的含量为
90. 94 滋g / mL,均高于正交试验的任何一个工艺,但两
者之间并无明显差异
。
2. 3摇 制剂工艺
2. 3. 1摇 处方设计摇 按上述最佳工艺制备每 1 mL 含 1.
5 g 原生药材的供试液,按“2. 2. 2冶项加入乙醇沉淀去
除杂质后
,继续浓缩至稠膏状,进行制剂处方设计。
2. 3. 2摇 增加溶解度摇 口腔喷雾剂(籽
药材
= 4. 5 g / mL)
0
5
2
广东药学院学报
,2006,22(3)