应用奠定基础。

　　

1 材料与方法

　　

1.1 材料与仪器

　　试验用菌种为江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室筛选的一株高产酿酒酵母

SCY6。

　　主要仪器包括超净工作台（

AIRTECH）、生物分光光度计（Eppendorf）、ZHWY-2102C

系列振荡培养箱（上海智城分析仪器制造有限公司）、

WFZ UV-200 型紫外分光光度计（尤

尼柯（上海）仪器有限公司）、

SBA-40E 生物传感分析仪（山东省生物传感器重点实验室）

等。

　　

1.2 方法

　　

1.2.1 酿酒酵母生长条件的优化 ①酿酒酵母生长曲线的绘制。以 5%的接种量（体积分数，

下同）将酿酒酵母菌株接入

50 mL YPD 液体培养基中（pH 5.0），在 28 

℃培养，每隔 5 h

取样测

OD600 nm，至 OD600 nm 变化趋缓为止，根据酵母浓度（血球计数法）和 OD600 

nm 绘制酵母的生长曲线[5，6]。②培养温度。以 5%的接种量接入对数生长期的酵母种子液至

50 mL YPD 液体培养基中（pH 5.0），分别在 24、26、28、30 

℃振荡培养 20 h 后测定菌液

OD600 nm，确定酵母生长的最适温度。③ pH。以 5%的接种量接入对数生长期的酵母种子液

于

50 mL YPD 液体培养基中，调菌液 pH 分别为 4.0、4.5、5.0、5.5、6.0，在 28 

℃下振荡培养

20 h 后测定菌液 OD600 nm，确定酵母生长的最适 pH。④葡萄糖质量分数[7]。分别在 50 mL 

YPD 液体培养基（pH 5.0）中添加质量分数 10%、15%、20%、25%、30%、35%的葡萄糖，在 28 

℃振荡培养 20 h 后测定菌液的 OD600 nm。 　　1.2.2 单因素试验优化酿酒酵母的发酵条件 

①接种量。分别按 4%、6%、8%的接种量将酿酒酵母种子液接入含葡萄糖质量分数为 15%的 50 

mL YPD 培养基中，在 28 

℃、150 r/min 的培养箱中发酵培养，24 h 后取样测定发酵液中的

乙醇含量。②

pH。YPD 培养基中添加葡萄糖的质量分数为 15%，调节培养基 pH 分别为

4.0、4.5、5.0、5.5、6.0，以 5%的接种量接入酿酒酵母种子液，在 28 

℃、150 r/min 的培养箱中

发酵培养，

24 h 后取样测定其乙醇含量。③氮源。根据表 1 配制含氮源的培养基，其中氮源 1

的添加量为

20 g/L，氮源 2 的添加量为 2 g/L，并加入一定量的无机盐，以 YPK 培养基为空

白对照。采用①～③优化后的条件进行发酵培养，

24 h 后取样测定其乙醇含量。

　　

1.2.3 正交试验优化酿酒酵母发酵条件 根据单因素试验结果，设计正交试验考察玉米浆

添加量、（

NH4）2SO4 添加量、pH 和接种量对发酵液中乙醇体积分数的影响[8，9]，因素与

水平见表

2。