10.加入 SP 复合物孵育 20-30 分钟。

11.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。

12.DAB-H2O2 孵育 5-10 分钟。

13.PBS 洗，水洗。

14.Harris 苏木素染核 5-10 分钟。

15.水洗，分化 ，蓝化，脱水，透明并封固。

(三)真空负压 LSAB 法

1.切片脱蜡至水。

2.0.3%H2O2 甲醇真空负压处理 5min.

3.水洗。

4.如果需要，可进行抗原修复。

5.PBS 洗 3 次，每次 1 分钟。

6.加入正常血清真空负压处理 5min。

7.摔干血清，加入第一抗体，真空负压处理 5 分钟。

8.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。

9.加入二抗(即连接抗体)真空负压处理 5 分钟。

10.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。

11.加入链卵蛋白复合物，真空负压处理 5 分钟。

12.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。

13.DAB-H2O2 孵育 5-10 分钟。

14.PBS 洗，水洗。

15.染核，分化，蓝化，脱水，透明并封固。

注：真空负压即将真空干燥中抽成真空。负压达 66.7KPa(500mmHg)

(四)Envision TM Systems.

1.切片脱蜡至水。

2.0.3%H2O2 甲醇处理切片 10 分钟。

3.水洗。

4.抗原修复。

5.PBS 洗 3 次，每次 1 分钟。

6.加入一抗体孵育 30-60 分钟。

7.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。

8.加入增强剂孵育 20-30 分钟。

9.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。

10.加入酶标抗兔/鼠，复合物，孵育 20-30 分钟。

11.PBS 洗 3 次，每次 2 分钟。

12.DAB-H2O2 孵育 5-10 分钟。

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