原 理： 在

pH=4.2 环境 中， 带正 电荷 的白 蛋白 （ pI=4.9 ）可 以与 阴离 子染 料溴 甲酚 绿

（

BCG）结合，溶液由黄变蓝，在波长 630nm 具有最大光吸收，并与白蛋白浓度成正比，

与同样处理的白蛋白标准比较，可求得血清中白蛋白含量。
二、血清白蛋白测定
试剂：
溴甲酚绿（

BCG）试剂：于 1L 容量瓶中盛蒸镏水约 400ml，加琥珀酸缓冲贮存液 100ml，

用吸管准确吸取

BCG 贮存液 8ml 加入，并将内壁沾的染料冲洗入液体中，加叠氮钠存液

2.5 ml，聚氧化乙烯月桂醚贮存液 2.5ml，最后用蒸馏水稀释至刻度，配好的 BCG 试剂 pH
应为

4.15 ± 0.05。

白蛋白标准液：

40g/L，也可用定值参考血清。均需置冰箱保存。

二、血清白蛋白测定
操作：
血清白蛋白（

g/L）= (Odu/Ods) ×标准白蛋白浓度（g/L）

同时测定血清总蛋白浓度，减去血清白蛋白浓度，可得血清球蛋白浓度，并可计算血清白
蛋白

/球蛋白比值。

三、血清蛋白电泳
 电泳：带电的胶粒或大分子在外加电场中，向带相反电荷的电极作定向移动的现象称为电
泳。
 应用
1.  分离各种有机物：如蛋白质、酶、核酸等
2.  分析某种物质的纯度及分子量
电泳的基本原理
 电场中推动带电质点运动的力（F）等于质点所带净电荷量（Q）与电场强度（E）的乘积。
 F＝QE 
 质点前移受阻力（F）影响，球形质点服从 Stoke 定律，即：F

′＝6πrην（r 半径，η 介质粘

度，

ν 质点移速） 

质点在电场中稳定运动时：

F＝F

′即：QE＝6πrην

 同电泳条件下不同物质因其分子大小（r）和带电量（Q）差异而有不同泳动速度，因此，
一定时间可分离。
 按其泳动速度从正极端起〔即速度最快）依次为白蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白和 γ-球蛋白等条
带，有的动物

α-球蛋白和 β-球蛋白可分为两个条带。

 
血清蛋白的

pI 大多在 7.5 以下，在 pH8.6 的巴比妥缓冲液中以负离子形式存在，并且蛋白

质的分子量、立体构象、等电点以及形状也有差异，在电场中迁移速度不同，可以在醋酸纤
维薄膜上分离成

A、α1、α2、β 和 γ 五条区带。

醋酸纤维素（二乙酸纤维素）薄膜具有匀一的泡沫状结构，渗透性强，对分子移动无阻力
用它作区带电泳的支持物，具有用样量少，分离清晰，无吸附作用。目前可用于血清蛋白、
脂蛋白、糖蛋白、酶的分离和免疫电泳等方面。
醋酸纤维素薄膜经

1,4－二氧六环、透明液或液体石蜡处理即透明，因而可得背景为无色的

电泳图谱。
醋酸纤维素薄膜的特性
实验操作及注意事项
膜的预处理：将薄膜切成

2.5×8cm，无光泽面向下，漂浮于巴比妥缓冲液面上，膜条自然

浸湿下沉。取充分浸透的膜条，滤纸吸取多余的缓冲液，不要弄太干。