样品中所含菌种类别，若

ATP／CFU 较小，则样品中可能主要含 有形态较小的 G-细菌或

孢子；若

ATP／CFU 较大，则样品中可能主要含有酵母菌或 形态较大的 G+细菌。

　　

2.4 ATP 生物发光法的检测步骤大体包括：取样、样品 ATP 的萃取、添加荧光素．荧 光

素酶、测定生物发光量、求出

ATP 浓度和活菌数。通常，样品未经处理是不能 测定 ATP 的。

测定时需先将样品与

ATP 提取剂混合，使细胞膜和细胞壁溶解，释放 出 ATP。ATP 提取剂

是以表面活性剂为基质的专用试剂。然后，提取出的

ATP 再与 荧光素-荧光素酶生物发光剂

作用，用发光检测仪测定

ATP 与发光剂反应的生物发 光量。通过预先测定的 ATP 标准曲线，

得出活菌的总

ATP 量，即可得出细菌总数。

　　

3 ATP 生物发光法的特点及应用

　　

3.1 ATP 生物发光法的优点主要是快速、简便、重现性好；而由于其要求样品中 细菌浓

度最低不少于

 1000 个／ml，使得灵敏度有时达不到卫生学要求。此外， ATP 生物发光法不

能区分微生物

 ATP 与非微生物 ATP；并且由于食品本身、ATP 提取剂等含有离子，某些离

子又会对

 ATP 的测定造成干扰、抑制发光作用等。

　　

3.2 ATP 生物发光法的应用范围十分广泛，现己应用于食品工业的众多领域。例 如，用

生物发光法测定肉类食品中细菌污染情况。研究表明，

ATP 生物发光法与 标准的细菌培养

菌落计数法相比，二者具有良好的相关性

(r=0．98)。此外，ATP 生物发光法还可用于乳制

品中乳酸菌的测定、啤酒中菌落总数测定、调味品及脱

 水蔬菜的细菌学测定等。实验表明，

ATP 生物发光法与传统的琼脂平板法均具有 高度的相关性。
　　

3.3 食品生产环境的清洁度检测是 HACCP 的重要内容。HACCP 是指在食品生产和流 通

的整个过程中，对可能发生危害食品安全之处进行分析，确定出应重点进行卫

 生管理之处，

并在此处设定卫生管理标准，经常进行监测，记录下检测结果，以

 防止危害健康的事件发

生。以往食品生产环境的清洁度管理多采用棉拭取样与平

 板培养法共用的方法来检测表面

附着的微生物，这样就使得检测时间长、检测结

 果滞后，因而不能满足 HACCP 管理系统的

要求。而食物残渣是食品生产环境的主

 要污染物质，且各种食品中均含有 ATP，ATP 耐热

性较强。因此，采用

ATP 生物发 光法可快速、简便地检测出食品生产环境的清洁度。这样，

ATP 生物发光法就十 分适合 HACCP 系统的清洁度检测。
　　

4 结论与展望

　　

4.1 ATP 生物发光法具有简便、快速、价廉等优点,作为食品生产和流通过程中的微生物

检测和清洁度检测的一种新方法

,近年来,在国外倍受推崇,在美、日等国 已广泛应用,并已有

专用检测仪器。
　　但是

ATP 生物发光法也会受到微生物数量、非微生物 ATP、ATP 提取剂、pH、 温度、色素

等诸多因素的影响。在实际应用中，应设法将这些干扰因素减少到最

 低。

　　

4.2 目前的 ATP 生物发光法应主要围绕以下进行展开：

　　

4.2.1 微生物细胞中 ATP 的含 量与菌的种类、大小及细胞生长所处的周期有关，因此，

还需对细菌等微生物进

 行分级分离工作，以确定菌的种类等。

　　

4.2.2 在发光体系中，荧光素、荧光素酶、缓冲液、样品提取液等“量”的分配是 否能进一

步优化。可以尝试用

SAS 软件进行试验优化设计，以期得到优化后的试 验条件；

　　

4.2.3 发光增强剂、发光抑制剂在生物发光反应中的具体作用机理，如何减少甚至 消除

抑制剂对发光反应的不良影响；
　　

4.2.4 发光检测仪是否受波长、电压等影响， 具体影响如何；

　　

4.2.5 荧光素、荧光素酶种类的选择与优化；

　　

4.2.6 发光检测仪的灵敏度的进一步提高，重复性的保证等。现在，已涌现将免疫 磁分

离技术应用于

ATP 生物发光法，二者结合使灵敏度大大提高。 随着对此种方法不断改进和

完善

,ATP 生物发光法可望发展成为一种较为理想的 微生物检测方法而得到更广泛的应用。