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自某化工厂的有机污染土壤.定期加入含有联苯浓度为 1000 mg · L-1 的初步驯
化营养液,定期翻动土壤,保持一定的土壤湿度,并控制土壤 pH 值在 6.5~7.5
之间,驯化 1 个月.取上述初步驯化过的土壤 1 g,50 mL 灭菌液体富集培养基,
装入 100 mL 的三角瓶中,在 30 ℃、150 r · min-1 条件下振荡培养.待培养液
发生浑浊时,在富集培养基上划线分离出单菌落.
2.3.2 降解菌强化驯化、分离
挑取上述分离出的单菌落,50 mL 含有一定浓度 PCB77 的灭菌 MSM,装入 100
mL 的三角瓶中,在 30 ℃、150 r · min-1 条件下振荡培养,每 5~7 d 转接 1
次,在相同条件下进行传代培养 2 个月,并不断提高 MSM 中的 PCB77 的浓度,驯
化菌株对 PCB77 的降解能力.取驯化培养得到的菌悬液,在固体 MSM 上划线分离
纯化,筛选出对 PCB77 有较高降解能力的菌株,将该降解菌株保存于试管斜面上,
4 ℃冷藏保存.
2.3.3 降解菌鉴定及理化性质测定
菌株测序委托上海生物工程有限公司完成,得到该细菌的 16S rDNA 序列.
登陆 Genbank,通过 Blast 数据库进行同源性比较,利用 MEGA5.0 软件,选用邻
接法(Neighbor Joining),绘制该细菌的系统发育树.参考《常见细菌系统鉴定
手册》、《伯杰氏系统细菌学手册》和相关文献进行形态和生理生化鉴定.
2.3.4 菌株的生长曲线测定
将纯化后的菌株分别接种在液体富集培养基、含有 1000 mg · L-1 联苯的
MSM、含有 1 mg · L-1 PCB77 的 MSM 中,于 30 ℃和 150 r · min-1 条件下培
养,间隔一定时间取 2 mL 培养液,采用紫外-可见分光光度计(UVmini-1240,
SHIMADZU)测定其在 600 nm 处的吸光度值,以此来表征培养液中菌体浓度.
2.4 高效降解菌降解率影响因素实验
2.4.1 菌液的制备