较好的立体选择性

, 因此脂肪酶被广泛地用来拆分外消旋醇和羧酸。拆分的主要途径为

立体选择性水解、醋化或转醋反应。�

用乙烯基醋为活性醋

, 在无水二氯甲烷中用假单胞菌脂肪酶催化氰醇的化学拆分, 得S

型醇

,经化学转化合成β一肾上腺素抑制剂。此外, 脂肪酶还用于醋环仲醇的拆分, 拟除虫菊醋

中间体的拆分

, 除草剂对甲氧基苯甲酸基奈普生、布罗芬的拆分等。酯交换还可以合成生物柴

油。

 

5、脂肪酶的测定方法
脂肪酶活力的测定方法主要有碱滴定法和分光光度法。�

5.1  定义

1g 固体酶粉，于 40℃，

P

H＝7.5 的条件下，水解脂肪每分钟产生 1 微摩

尔（

umol）的脂肪酸，即为一个脂肪酶国际单位，以 u/g 表示。

5.2  原理

脂肪酶在一定条件下，能使甘油三酯水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油单酯和

甘油，所释放的脂肪酸，可用标准碱溶液进行中和滴定，用

P

H 计或酚酞指示反

应终点，根据消耗的碱量，计算其酶活力。

反应式为：

   RCOOH＋NaOH—— RCOONa＋H

2

O

5.3  试剂和溶液
5.3.1  聚乙烯醇（PVA）聚合度 1750±50
5.3.2  橄榄油

5）

5.3.3  95％（V/V）乙醇（GB 679）
5.3.4  底物溶液的制备
a、称取聚乙烯醇（PVA）40g，加水 800 mL，在沸水浴中加热、搅拌，直到全
部溶解，冷却后定容至

1000 mL。以干净的双层纱布过滤，取滤液备用；

b、量取 4％PVA 溶液（A4、3、4a）150 mL，加橄榄油 50 mL，用高速组织捣
碎机处理

6min（分 2 次处理，每次 3min，中间休息 5min），即成乳白色

PVA 乳化液。该溶液要现用现配。该溶液如贮存在冰箱中，有效期为一周。
5.3.5  0.025mol/L 磷酸缓冲液（

P

H＝7.5）

甲液

  称取磷酸二氢钠（NaH

2

PO

4·2H2O

）

17.01g，加水溶解并定容至 500 

mL。
乙液

  称取磷酸二钠（Na

2

HPO

4

·12H

2

O）44.77g，加水溶解并定容至 500 

mL。
使用液

  吸取甲液 13 mL，加乙液 100 mL，混匀，即成 0.25mol/L 磷酸缓冲

液。使用时用水稀释

10 倍，即成 0.025mol/L 磷酸缓冲液，用

P

H 计校正。

5.3.6  氢氧化钠标准溶液 c（NaOH）＝0.05mol/L
按

GB 601 配制与标定 c（NaOH）＝0.05mol/L 氢氧化钠标准溶液。使用时，

准确稀释

10 倍。

5.3.7  10g/L 酚酞指示液
5.4     仪器和设备
5.4.1   恒温水浴 40±0.2℃
5.4.2   高速组织捣碎机  8000～12000r/min
5.4.3   

P

H 计分度值为 0.02

P

H 单位或 2mv

5.4.4   电磁搅拌器
5.4.5   微量滴定管  10 mL

≤

，分刻度

0.05 mL

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