2.1 菌种特性
巨大芽孢杆菌：杆状，末端圆；单个或呈短链排列，
1.2～1.5×2.0～4.0 微米；能运动；芽孢
1.0～1.2×1.5～2.0 微米，椭圆形，中生或次端生；能够液化明胶慢、胨化牛奶、水解淀粉、不还原硝
酸；巨大芽孢杆菌为产孢杆菌，且为革兰氏阳性菌及
，也为常见的油中腐生菌。
2.2 菌种的分离
从巨大芽孢杆菌的特性分析，可以从腐败的食用油中分离巨大芽孢杆菌。具体方法是取适量腐败食
用油，将其放入适合巨大芽孢杆菌生长的培养液中剧烈震荡，使其中的细菌大量进入到培养液中稀释
溶液到适当的倍数，在合适的培养基上涂布、培养，长出纯的的单菌落，对单菌落中细菌进行分析，确
定巨大芽孢杆菌。分离培养基成分（
%
）：酵母膏
0.3
、牛肉膏
0.3
、玉米浆
0.3
、蛋白胨
1.0、KH2PO4
0.1 、 MgSO4 0.04
、 尿 素
0.1 、 CaCO3 0.1
、 山 梨 糖
2.0
、 琼 脂
2.3 、 10ppm FeSO4
0.1mL/L 、pH=607~7.0
[2]
。
2.3 菌种的检验
接下来进行的步骤就是对纯菌落中的细菌进行检验，确定巨大芽孢杆菌。进行该步骤在目前比较先
进的方法是多重
PCR 技术检测。其基本方法是挑取培养基上单个菌落, 接种于营养肉汤液体，30℃快
速振摇培养
16h，, 离心取沉淀, 采用硅藻土吸附法快速提取各菌株的基因组 DNA,
作为
PCR 的模板
[3]
。然后对所获取的
DNA 利用 PCR（聚合酶链式反应）进行扩增，获取足够量的 DNA，以便进行测序。
测序工作可送到专门服务公司进行，如海生工生物工程技术服务有限公司。
若要对菌种的形状加以改良，提高效率或增强环境适应能力等，可通过诱变育种、杂交育种、基因
工程育种或人工选择等方法进行，如通过基因工程育种获得了能够生产胰岛素的菌种，利用射线照射、
太空失重育种等。由于本文未涉及菌种改良就不详细叙述菌种改良这一方面的内容。
3 菌种的保藏
菌种的保藏是指将有用的微生物以特定培养形态在特定的环境条件下存放，以保持种的存活、纯粹
和遗传性状的稳定。
原理：根据微生物的生理生化特性，人为地创造条件，使微生物处于代谢不活泼，生长繁殖受到
抑制的休眠状态，以减少菌种的变异。
意义：可以避免在传代过程中容易发生变异、污染甚至死亡，生产菌种的退化，防止优良菌种丢失。
生黑醋杆菌和巨大芽孢杆菌的保藏属于常规方法，人为地创造条件（低温、干燥、缺氧、低营养等），
使性状优良的微生物处于代谢不活泼，生长繁殖受到抑制的休眠状态，以减少菌种变异的几率。同时在
保藏过程中要避免对生黑醋杆菌和巨大芽孢杆菌的生命活性造成损伤。常用的保藏方法有悬液包藏法
（寡营养条件下的保藏）、传代保藏法（易发生培养基干枯、菌体自溶、基因突变，比较适合试验室中短
时间保藏）、矿物油中浸没保藏、干燥载体保藏（如沙土管干燥保藏法）、固体曲
(麸曲)保藏法、冷冻保
藏法（又分为普通冷冻保藏技术
(-20℃)超低温冷冻保藏技术(-60～-80℃)
液氮冷冻保藏技术
(-130
～
-196℃)）。
当然，要想做到很好的将菌种保藏起来时很不容易的，有专门的菌种保藏机构可以提供保藏服务 ，
应综合考虑各方面的因素决定选用何种保藏方式。
3