２）发酵罐接种。在火焰圈的保护下将摇瓶种子由接种口接入发酵罐。

 

　　３）发酵罐发酵。打开控制系统，调整空气流量为１

∶１（Ｖ／Ｖ，即每分钟通过罐体

的空气体积除以罐体容积），温度设置为２８

 

℃自动控制，罐压为０．０３～０．０５ 

Ｍ

P ａ，搅拌速度为３００ ｒ／ｍｉｎ。 

　　４）取样及提取。对于摇瓶发酵，从６０

 ｈ开始至１８０ ｈ，每１２ ｈ取样１００ ｍ

Ｌ发酵液，置４

 

℃冰箱中保存。对于发酵罐发酵，从５０ ｈ开始至１６８ ｈ，每１２ ｈ

取样１００

 ｍＬ发酵液，置４ 

℃冰箱中保存。 

　　１．２．４

 冻干及提取 对于取出的摇瓶和发酵罐样品，转入冻干用不锈钢小盒中，冷

冻干燥。样品冻干后，用５

 ｍＬ ５０％甲醇－水湿润，然后加入４５ ｍＬ乙酸乙酯，在摇

床上１５０

 ｒ／ｍｉｎ振荡萃取１ ｈ。将有机相转入洁净烧杯中，真空减压浓缩至干，加

入５

 ｍＬ色谱纯甲醇溶解样品，转入１０ ｍＬ离心管中离心、待检测。 

　　１．２．５

 ＨＰＬＣ方法 

　　１）分析条件。色谱柱：Ｄｅｖｅｌｏｓｉｌ

 Ｃ１８（日本），１５０ ｍｍ × ２ ｍｍ

（ｉ．ｄ），粒径５．０

 μ ｍ；进样量：３ μ Ｌ；流动相：Ａ（水）、Ｂ（乙腈）（梯度洗

脱）；柱温：４０

 

℃；流速：０．３ ｍＬ／ｍｉｎ；检测条件：ＰＤＡ全波长扫描。使用

以下方法进行梯度洗脱，流动相中加入０．２％乙酸［８］。

 

　　

 

　　

 

　　２）制备条件。色谱柱：美国Ｓｕｎｆｉｒｅ

?

�ＯＢＤ Ｃ１８Ｐｒｅｐ 柱，２５０ 

ｍｍ

×１９ ｍｍ（ｉ．ｄ），粒径１０.0 μ ｍ；柱温：室温；流动相：Ａ（水），Ｂ（乙

腈）（梯度洗脱条件如表１）；进样量：３

 ０００ μ Ｌ；流速：２７ ｍＬ／ｍｉｎ；检测

条件：ＰＤＡ全波长扫描。

 

　　３）质谱检测条件。ＭＳ条件：电喷雾电离（ＥＳＩ）；毛细管电压：３．５

 ｋＶ；

锥孔电压：４５

 Ｖ；离子源温度：１００ 

℃；脱溶剂气温度：３００ ℃；脱溶剂气体流

速：５００

 Ｌ／ｈ；锥孔气体流速：５０ Ｌ／ｈ。 

　　２

 结果与分析 

　　２．１

 不同发酵方式下ＷＳ－２２０１１产生的次生代谢产物多样性分析 

　　将两种发酵方式下同一时间点的发酵提取液样品，分别取１

 ｍＬ进行ＨＰＬＣ检测。

检测结果见图１，图

1-A 为发酵罐发酵提取液ＨＰＬＣ色谱图，图 1-B 为摇瓶发酵提取液

ＨＰＬＣ色谱图。总的来看，对于ＷＳ－２２０１１菌株，在发酵罐发酵和摇瓶发酵两种发
酵方式下产生的次生代谢产物及多样性基本一致，两种发酵提取液均在１０

.00～２０.00 

ｍｉｎ产生了６个次生代谢产物，在图

1-B 中为Ｐｅａｋ １１．８７，Ｐｅａｋ １２．７

２，Ｐｅａｋ

 １３．３６，Ｐｅａｋ １６．７７，Ｐｅａｋ １８．２６和Ｐｅａｋ １９．

５９，且６个化合物保留时间基本相似，紫外吸收光谱相同。此外，在摇瓶发酵下还产生一
个量较少的化合物Ｐｅａｋ

 １５．７２，在发酵罐方式下并未发现此化合物，其原因可能

与发酵罐无摇摆过程有关。

 

　　２．２

 不同发酵方式下ＷＳ－２２０１１菌株各次生代谢产物的动态变化 

　　为比较摇瓶发酵和发酵罐发酵两种方式下ＷＳ－２２０１１各次生代谢产物的动态变
化趋势，该研究将相同取样时间点的摇瓶发酵提取液和发酵罐发酵提取液的次生代谢产物
的峰面积进行对比分析，得到各个化合物的动态变化趋势图（图２）。总的来看，除在发酵
罐发酵中并未产生Ｐｅａｋ

 １５．７２外，其他６个次生代谢产物在摇瓶发酵和发酵罐发

酵两种方式下的产量变化趋势基本一致，说明两种发酵方式均可以保证次生代谢产物的多
样性和产量。