进行优化，建立高产菌株的最佳摇瓶发酵条件。

接种量

淀粉含量

蛋白胨含量

处理一

3％

5g/L

5g/L

处理二

3％

10g/L

10g/L

处理三

5％

5g/L

10g/L

处理四

5％

10g/L

5g/L

2．2．4   

淀粉酶的初步提纯及酶活性的测定

2.2.4.1  

淀粉酶的初步提纯：收集发酵液，

3000r/min 离心 10min，去除菌体，

在上清液中加入

65％饱和度的硫酸铵，待硫酸铵充分溶解后于

4℃盐析 2h，

然后

5000r/min 离心 20min，得到初步纯化的淀粉酶。

2.2.4.2   

标 准 曲 线 的 制 作 和 酶 活 性 的 测 定 ： 将 可 溶 性 淀 粉 稀 释 成

0.2％、

0.5％、1％、1.5％和 2％的稀释液，按下表进行标准曲线的制作和酶活性

的测定。

管号

1

2

3

4

5

6

7．1

7．2

7．3

7．4

淀粉稀释液/mL

2（0％

）

2（0.2

％）

2（0.5

％）

2（1％

）

2（1.5

％）

2（2％

）

2（2％

）

2（2％

）

2（2％

）

2（2％

）

缓冲液/mL

1

1

1

1

1

1

1

1

1

1

40℃水浴保温 5min

蒸馏水/mL

1

1

1

1

1

1

0

0

0

0

粗酶液/mL

0

0

0

0

0

0

1

1

1

1

40℃水浴保温 30min，然后加入 0.5mol/L 乙酸 10 mL，混均吸取反应液 1 mL

碘液/mL

10

10

10

10

10

10

10

10

10

10

A

660

（平均

值）

（

7．1、7．2、7．3、7．4 中加入的粗酶液，即为正交试验设计中处理一、处理二、

处理三、处理四所得的淀粉酶液）
注：

①前 6 组的数据用于标准曲线的制作：以淀粉浓度为横坐标，吸光度为纵

②

坐标，作标准曲线； 后

4 组的数据用于酶活性的测定：测得吸光度后，可从

标准曲线中查出相应的淀粉浓度，求出被消耗的淀粉量，这里的酶活即为每毫
升 粗酶 液于

40℃，PH6.0 的条件下，每小时液化可溶性淀粉的毫克数

【

mg 可溶性淀粉/m

L·h】。

3  

、 结果与分析

3. 1  

 

菌落的形态特征

菌落在以淀粉为唯一碳源的分离培养基中生长，培养

48 h形成白色圆形菌

落，菌落背面乳白色，边缘不光滑，形态规则，质地较密，有透明圈，无沉淀。

因

素

处 理