第 3 期
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1 2 5 最佳培养基初始 pH 值的确定
取出发菌株活化, 然后取一环接入种子培养
基中培养, 24 h后分别取 1 mL 培养液, 加入到
pH 值分 别为 5 0、6 0、7 0、8 0、9 0, 碳源和 氮
源已优化的产酶培养基中, 37
下培养 48 h. 分
别离心收集粗酶液, 测定其淀粉酶活力, 根据所
测定的结果确定最佳培养基的初始 pH 值.
1 2 6 最佳培养温度的确定
取出发菌株活化, 然后取一环接入种子培养
基中培养, 24 h后分别取 1 mL 培养液, 加入碳
源、
氮源和 pH 值已优化的产酶培养基中, 分别
于 33
、35
、37
、39
、41
下培养 48 h.
分别离心收集粗酶液, 测定其淀粉酶活力, 根据
所测定的结果确定最佳培养温度.
1 2 7 最佳溶氧量的确定
取出发菌株活化, 然后取一环接入种子培养
基中培养, 24 h后分别取 1 mL 培养液, 接入已
优化碳源、氮源和 pH 值的产酶培养基中培养,
产酶培养基的装液 量分别为 10 mL、15 mL、20
mL、25 m L、30 mL, 37
下培养 48 h, 分别离心
收集粗酶液, 测定其淀粉酶活力, 根据所测定的
结果确定最佳溶氧量.
1 2 8 最佳产酶时间的确定
取出发菌株活化, 然后取一环接入种子培养
基中培养, 24 h后分别取 1 mL 培养液, 接入已
优化碳源、氮源和 pH 值的产酶培养基中培养,
分别于 0 h, 12 h, 24 h, 36 h, 48 h, 60 h 取样, 测
定发酵液的酶活力, 根据所测定的结果确定最佳
产酶时间.
1 2 9 离子对产酶的影响
通过向培养基中添加质量分数为 0 05% 的
M gSO
4
、
质量分数为 0 05 % 的 CaC l
2
和质量分数
为 0 005% 的 F eSO
4
等不同离子进行产酶实验,
培养 48 h, 测定酶活力, 根据测定结果确定最适
添加的离子.
1 2 10 酶反应最适 pH 值的确定
分别用 pH 值为 4 0、5 0、6 0、7 0、8 0、9 0
的缓冲溶液配制可溶性淀粉液, 将在最适条件下
培养获得的粗酶液分别在以 上各种 pH 值条件
下测定其淀粉酶活力, 根据所测得的结果确定淀
粉酶反应的最适 pH 值.
1 2 11 酶反应最适温度的确定
将在最适条件下培养获得的粗酶液分别在
27
、32
、37
、42
、47
、52
等各种不
同温度下测定淀粉酶活力, 根据所测得的结果确
定淀粉酶反应的最适温度.
2 实验结果
2 1 初筛结果
土样经稀释并在淀粉培养基平板上培养后,
共挑选出 24株能水解淀粉的细菌, 分别将 24株
细菌接种到斜面培养基上, 编号为 B1~ B24, 菌
株产生水解圈的情况如图 1所示.
图 1 淀粉酶产生菌产生的淀粉水解圈
F ig. 1 H ydrolysis circle of sta rch produced by
a stra in wh ich can produce am y lase
2 2 复筛结果
将所有初筛得到的菌种分别点种到淀粉培
养基平板上进行培养, 待菌落长成后向菌落上滴
加碘液, 比较淀粉水解圈大小, 挑取 d
0
/d
1
( d
0
为
水解圈直径, d
1
为菌落直径 )较大的 5株菌株连
续进行 3次平板点种培养, 最终选取 d
0
/d
1
值最
大的菌株 B5 作为本实验出发菌株. 将 B5菌株
接多支斜面, 经培养后于低温保存. 复筛结果见
表 1.
表 1 复筛结果
T ab le 1
R esults of re screen ing
编号
水解圈直径 d
0
/ cm
菌落直径 d
1
/ cm
d
0
/d
1
1
2 40
1 30
1 85
2
2 90
1 80
1 61
3
1 70
1 00
1 70
4
1 90
1 20
1 58
5
1 90
0 60
3 17