第 31 卷

昆 明 医 学 院 学 报

46

remission and recent effective ratio was 100%．No tumor progressing period was 4 to 26 months and the median

was 13 months．The cells surface markers CD3

+

， CD4

+

， CD8

+

of patient’

s PBMC had increased （

P ＜0.05）

compared with that before transfusion，which meant patient's specific immune response was induced by CIK cells.

No adverse reaction was observed during the infusion of CIK cells for the 22 patients．Conclusion

CIK cells

have good clinical efficacy for gynecological tumor.

［Key words］ Cytokine- induced killer cells；Gynecologic tumor；Adoptive immunotherapy；Clinical

efficacy

多 种 细 胞 因 子 诱 导 的 杀 伤 细 胞 （cytokines

induced killers，CIK） 是一类由多种细胞因子诱导
产生的具 有 T 细胞的抗瘤活性和 NK 细胞的非
MHC 限制性杀瘤特点的细胞．1991 年由斯坦福
大学的 Schmidt－Wolf 等报道后，现成为免疫治疗
多种恶性肿瘤应用最为广泛的细胞治疗之一

[1]

．

CIK 细胞应用于临床需要足够数量的细胞及良好
的活性和细胞毒作用．但 CIK 细胞对妇科肿瘤的
临床治疗效果有待于进行系统地临床观察．本研
究对细胞增殖规律、细胞表型和细胞毒作用进行
研究，同时进行近期临床疗效、免疫反应、不良
反应观察.

1

材料与方法

1.1

研究对象

22 例妇科肿瘤患者最大年龄 75 岁，最小 37

岁，平均年龄 55.54 岁．其中卵巢癌 11 例，最大
年龄 75 岁，最小 45 岁，平均年龄 55.8 岁，子宫
癌 11 例，最大年龄 70 岁，最小 37 岁，平均年龄
55.27．

1.1.1

入组标准

组织学或细胞学确诊为卵巢癌

和子宫癌患者，接受过卵巢癌和子宫癌的规范化
治疗包括手术、化疗，末次治疗至开始接受 CIK
治疗的间隔时间 4 周；无法进行手术、放疗、化
疗的中晚期患者，患者预期生存＞3 个月；PS 评
分 60 分，无严重的病毒、细菌感染．本研究获本
单位伦理学委员会的批准，所有患者或由其法定
代理人签署了知情同意书，同意进行此免疫治
疗．
1.1.2

排除标准

正在接受放疗、化疗或其他全

身抗肿瘤治疗者；同时存在其他恶性肿瘤及传染
性疾病者；大手术伤口未完全愈合者； 怀孕期或
哺乳期妇女；存在违反本试验的体检或实验室异
常者；对生物制品无过敏反应者．

1.2

材料

RPMI 1640 购自美国 Gibco 公司．抗人 CD3

单克隆抗体 （Anti- CD3 mAb） 购自北京晶美基因
谷科技有限公司．IL- 2 购自江苏金丝利有限公
司．IFN－γ 购自上海克隆生物高新技术有限公
司 ． 流 式 试 剂 CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP、
CD3FITC/CD56PE/CD45PerCP 购自美国 BD 公司．
胎牛血清购自 HyClone 公司．淋巴细胞分离液购
自天津瑞灏生物制品科技有限责任公司．流式细
胞仪为美国 BD Calibur FACSTM．酶标分光光度计
为美国 Bio- Rad Model- 680．二氧化碳孵箱为美国
Forma Series Ⅱ Model 3111．BEL- 7404 人 肝 癌 细
胞株由中国科学院上海生物化学与细胞生物学研
究所细胞库提供．
1.3

方法

1.3.1

CIK 细 胞 培 养

淋 巴 细 胞 提 取 ， 采 用

Ficoll 离心分离，将分离的细胞密度调至 1×10

9

/L． 分 别 悬 于 传 统 RPMI 1640 培 养 基 （RPMI

1640＋100 mL/L FBS、

2 mmol/L 谷氨酰胺、

100 μg/L

青霉素、100 μg/L 链霉素） 和改良 RPMI 1640 培
养基 （RPMI 1640、100 mL /L FBS、2 mmol/L 谷
氨 酰 胺 、 100 μg/L 青 霉 素 、 100 μg/L 链 霉 素 、
HEPES 20 mmol/L、丙酮酸钠 8 mmol/L、β- 巯基
乙醇 20 μmol/L、适量的核苷酸和脱氧核苷酸），
加入 IFN－γ 1 000 U/mL，37 ℃、5％ CO

2

，培养

24 h 后，再加入抗人 CD3 mAb，50 ng/mL，IL- 2

1000 U /mL 37 ℃，5％CO

2

条件下培养．培养 9～

12 d 行体外细胞表型和细胞增殖检测．

1.3.2

细胞增值数量和表型测定

于培养当天及

9～12 d 用台盼蓝拒染法计数细胞，计算细胞扩增
数量，同时用流式细胞术分析细胞 CD3

+

CD56

+

．

方法参照文献

[2]

．

1.3.3

CIK 细胞体外杀伤活性分析

取培养 12 d

的 6 名患者的 CIK 细胞作为效应细胞， 靶细胞为
BEL- 7404 人肝癌细胞， 按效靶比 16:1、 8:1、4:1