2.1.1 样品来源

从株洲市某化工厂废水处理车间氧化池采集的活性污泥作为筛选降解菌株的样品.

2.1.2 培养基

种子培养基(LB):每升含酵母粉 5 g，胰蛋白胨 10 g，NaCl 10 g，pH 7.0~7.2.无机盐

培养基(MS):每升含 K2HPO4 0.4 g、KH2PO4 0.4 g、NaCl 0.1 g、(NH4)2SO4 0.04 g、MgSO4 ·

7H2O 0.1 g、MnSO4 · H2O 0.01 g、Fe2(SO4)3 · H2O 0.01 g、NaMoO4 · 2H2O 0.01 g，

加水定容至 1000 mL. 选择培养基:在已灭菌的 MS 培养基中，按浓度要求加入经 0.22 μm

微孔滤膜过滤的苯酚母液(10 g · L-1 水溶液)，pH 7.0.以上固体培养基需加入 1.8%的琼

脂粉，经 121 ℃、20min 高压灭菌备用.

2.2 实验方法

2.2.1 菌株的分离纯化

准确称量氧化池活性污泥 10 g，加入到装有 90 mL 三级水的锥形瓶中，30 ℃、200 r ·

min-1 恒温摇床中振荡培养 1 h.将重悬液按 2%接种量加入到含苯酚的选择培养基中，苯酚

浓度按 100、200、500、1000、1200、1500、2000 mg · L-1 依次提高以梯度驯化与富集降

解菌.经过多次转接培养，梯度稀释培养液并涂布于含苯酚固体选择培养基上，在 30 ℃恒

温培养箱中倒置培养 12 h.挑取菌落形态不同的单菌落接种至 LB 平板上，反复划线分离纯

化得到纯菌株，保存于 4 ℃冰箱中备用.

2.2.2 降解菌的筛选

将保藏的纯化菌株接种至 LB 平板上，划线分离单菌落.挑取单菌落接种到 LB 液体培养

基中，30 ℃、200 r · min-1 振荡培养至 OD600 为 2.0(对数生长期末期).连续活化 3 代后，

用生理盐水将发酵液离心洗涤 2 次并重悬菌体.以 2%接种量接种至选择培养基中，振荡培养

并间隔 12 h 检测培养液中苯酚含量，从中挑选降解苯酚能力最强的菌株.

2.2.3 形态特征鉴定

肉眼观察降解菌的菌落形状、大小、颜色、透明度、粘稠度、湿润度、隆起和边缘特征

及是否产色素等，菌体染色后用高倍显微镜观察菌体革兰氏染色、鞭毛、荚膜、芽孢等结构，

利用日立 S-3400N 型扫描电镜观察菌体大小和表面结构.

2.2.4 生理生化特性测定