PCR 方法是针对外源基因的启动子、终止子等来设计引物,经 PCR 反应对待测食品
DNA 样本进行扩增,经凝胶电泳分析靶标 PCR 产物的有无,来对食品进行定性判断,改
良的
PCR 方法可以进行定量分析。
PCR 方法具有很高的灵敏度,并且与蛋白质具有组织特异性相比,PCR 技术不受到材
料的限制,又由于核酸的性质比蛋白质稳定,变性之后复性也更为容易,所以通过
PCR 技
术可以检测初加工和深加工的食品,因此在转基因领域
PCR 技术使用最为广泛。(2)定量
PCR 法
PCR 方法虽然灵敏度高,但是操作繁琐,在操作过程中样本容易受到污染或因样品本
身感染相关病毒而呈现假阳性,有的时候还会呈现假阴性。由于
PCR 本身的局限性,又为
了满足定量分析的需求,为此,研究者们在定性筛选
PCR 方法的基础上,又发展了不同的
定 量
PCR 检 测方 法。 目前 ,国 外 较 为成 熟的 方法 主要 有定 量 竞 争 PCR (Quantitative
competitive,QC—PCR)和 Real—time PCR 法。
(
3)基因芯片法
基因芯片方法又称为
DNA 微探针阵列法,其实质就是高度集成化的反向斑点杂交技
术,是将目前通用的报告基因、抗性基因、启动子和终止子的靶片段固定在载体上,将待测
基因扩增、标记后与固定的探针进行杂交,杂交信号由扫描仪扫描后,由计算机对杂交信号
进行处理,分析判断得到杂交谱。
基因芯片方法与
PCR 方法具有相同的优点,但 PCR 方法检测范围窄、检测效率低,而
基因芯片方法能够一次性单独分析样品中大量的、不同种类的
GMO,进行筛查、定性、定量。
迄今为止,基因芯片技术应用于转基因食品检测的前沿,但由于基因芯片技术造价高,所
以应用阻力较大。
2.蛋白质水平检测
蛋白质水平的检测主要是针对外源蛋白质进行免疫学检测,主要方法有
ELISA、侧流型
免疫测定(
1ateral flow)、蛋白质印迹法和试纸法等。
(
1)ELISA 法
ELISA 法用于间接检测转基因表达的目的蛋白质。此方法是通过抗原与抗体之间的特异
反应来实现的,由于抗原只和它自己(或具有相同抗原决定簇)诱导产生的抗体发生反应
因此具有高度特异性,将抗原或抗体其中的一种标记上酶制成具有抗原抗体反应的特性和
酶的底物催化特性的酶标抗体,再将酶标抗体结合到载体上,在它与相应的另一种抗原或
抗体结合后,加上相应的底物进行显色,就可以根据底物显色的深浅做出定性或定量判断。
此外,试纸法也是利用抗原抗体的特异性反应来实现的,试纸法操作简便,适用于现场检
测和初筛。
ELISA 法成本低、特异性高、检测速度快、仪器操作简单、并且对人员要求不高,但是此
法灵敏度低、检测范围窄、易出现假阴性。由于加工过的食品的蛋白质容易失活,所以
ELISA
法只适用于原料性食品,难以检测加工过的食品。
(2)侧流型免疫测定
“侧流”型免疫测定是在最近十几年间发展起来的,之前主要用于医学领域。这种测定方
法基于夹心式技术原理与
ELISA 相似,但该法是建立在一种膜支持物上,标识过的抗原一
抗体复合物侧向迁移,与一种固定表面上的抗体结合。
“侧流”型免疫测定方法的操作过程简单,且不需要特殊实验设备,目前市场上也出现
了用于侧流分析并能用于野外测试的试剂盒。
(
3)蛋白质印迹法
蛋白质印迹法将电泳分离、抗原抗体特异性结合及酶显色反应三者结合起来用于分离、
检测复杂混合物中特异的目的蛋白质,灵敏度为
1~5ng。蛋白质印迹法中印迹上的目的蛋
白(抗原)与一抗结合后,再加入能与一抗专一结合的酶标记二抗,最后通过对二抗上标