和人工生理生化实验鉴定发展进入了基于仪器自动化分析的鉴定系统阶段

.近 20 年来,一系

列商品化自动鉴定系统相继推出

,并在应用中取得理想效果,如 VITEK 系统、MIDl 系统 、

BIOLOG 系统、 SENSITl．TRE 系统、AUTOSCEPTOR 系统以及 MICROSCAN 系统等.下面

以

BIOLOG 微生物鉴定系统为例,简述微生物自动鉴定系统的工作原理:BIOLOG 微生物自

动分析系统是美国

Biolog 公司从 1989 年开始推出的一套微生物鉴定系统,该系统主要根据

细菌对糖、醇、酸、醋、胺和大分子聚合物等

95 种碳源的利用情况进行鉴定.细菌利用碳源进

行呼吸时

,会将四哇类氧化还原染色剂(TV)从无色还原成紫色,从而在鉴定微平板(96 孔板)上

形成该菌株特征性的反应模式或

“指纹图谱”,通过纤维光学读取设备——读数仪来读取颜色

变化

(分为“自动”和“人工”两种读取方式),由计算机通过概率最大模拟法将该反应模式或“指

纹图谱

”与数据库相比较,可以在瞬间得到鉴定结果,确定所分析的菌株的属名或种名.以

BIOLOG 系统 6．01 版数据库为例,包含了革兰氏阴性好氧菌 524 种、革兰氏阳性好气菌 341

种、厌氧菌

361 种、酵母菌 267 种、丝状真菌(含部分酵母菌)619 种以及几种特殊的致病菌,目

前这个数据库已进行更新

.利用微生物快速系统进行细菌鉴定,能节省时间,但由于其在数据

比对过程中记入一些非特异性的阳性反应孔

,会造成偶然误差,从而引起个别鉴定结果不稳定,

另外此类仪器本身及其耗材价格均较高

.

 

3、分子生物学鉴定

    分子生物学鉴定目前比较流行的主要是核酸检测技术,包括基因测序、指纹图谱技术、基因

探针技术、聚合酶链反应

(PCR)、GC 含量测定等.PCR 和核酸杂交单独或结合在仪器已经形成

比较经典的核酸检测技术

,目前这两者已经得到了较大范围的推广和应用.

    下面将简单介绍几种核酸检测技术的原理:

DNA 的 G+C 含量测定法

    此法是根据细菌的 DNA 中 G+C 含量的特异性来进行细菌鉴定,通过熔解温度(Tm)法或浮

力密度法测定细菌

DNA 中 G+C 的含量,通过对比来鉴定细菌.